[发明专利]一种线粒体定位多肽、定位系统及其应用

权利要求书

1.一种线粒体定位多肽，其特征在于，所述肽选自如下序列：

由SEQ ID NO. l、 SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 5任一所示的氨基酸序列组成的多肽。

2.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括如权利要求1所述的线粒体定位多肽和目的蛋白。

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中，

所述线粒体定位多肽位于所述目的蛋白的N端或C端。

4.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述目的蛋白是荧光蛋白。

5.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述目的蛋白为绿色荧光蛋白。

6.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的线粒体定位多肽或如权利要求2-5任一项所述的融合蛋白。

7.如权利要求6所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列为SEQ IDNO. 2、SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 6中的一种。

8.如权利要求6所述的分离的多核苷酸，其特征在于，当所述多核苷酸编码如权利要求2-5任一项所述的融合蛋白时，所述多核苷酸为融合基因，所述融合基因自上游至下游依次包括编码线粒体定位多肽的基因序列和编码目的蛋白的基因序列。

9.如权利要求8所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述融合基因在线粒体定位信号的末端增加碱基G。

10.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求6-9任一项所述的分离的多核苷酸。

11.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如权利要求10所述的重组表达载体，或所述宿主细胞基因组中整合有如权利要求6-9任一项所述的分离的多核苷酸；所述宿主细胞为非植物细胞。

12.如权利要求1所述的线粒体定位多肽或权利要求2-5任一项所述的融合蛋白或权利要求6-9任一项所述的分离的多核苷酸或权利要求10所述的重组表达载体或权利要求11所述的宿主细胞在以下一项或几项中的应用：

制备定位线粒体或指示线粒体具体位置或形态的产品；

制备将目的蛋白定位或导入线粒体的产品；

制备在线粒体中过表达目的蛋白的产品；

制备治疗与线粒体相关疾病的药物；

制备与线粒体相关疾病的疫苗；

制备研究目的蛋白与线粒体的相互作用的产品。

13.一种将目的蛋白定位于线粒体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)将如权利要求6-9任一项所述的分离的多核苷酸导入靶细胞中，表达融合蛋白，从而将所述目的蛋白定位于所述靶细胞的线粒体上；或，

(b)将如权利要求2-5任一项所述的融合蛋白加入靶细胞的生长环境中，从而使目的蛋白通过靶细胞的细胞膜进入所述靶细胞中，并定位于靶细胞的线粒体上；所述融合蛋白自N端至C端依次包括线粒体定位多肽和目的蛋白的氨基酸序列。