[发明专利]内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法

权利要求书

1.一种内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、构建包含血管区域(1)及其周围限位孔结构(2)的结构模型；

步骤2、用纯黑色填充于结构模型之外的区域；

步骤3、根据步骤2得到的结构模型利用光刻技术制作阳模1#(3)和阳模2#(4)，二者血管尺寸及形状相同，阳模2#(4)中血管高度高于阳模1#(3)；

步骤4、按照质量比A:B＝1：1混合配制AB双组份透明硅橡胶溶液；充分混合后抽真空至硅橡胶溶液成无色透明；

步骤5、清洁阳模；

步骤6、抽真空后的硅橡胶溶液浇筑在阳模2#(4)上至硅胶液固化取下阳模2#(4)，得到硅胶模片(5)；

步骤7、硅胶膜片(5)与阳模1#(3)配合，硅胶模片(5)与阳模1#(3)的血管区域(1)之间插入进口微管(6)和出口微管(8)，形成微通道I(7)；

步骤8、对微通道I(7)内表面进行灭菌处理，并进行消毒和灭菌；

步骤9、将生物试剂注入微通道I(7)中直至生物试剂充满微通道I(7)；

步骤10、微通道I(7)置于37℃细胞孵箱内干燥10～15分钟使其内表面干燥；

步骤11、将平滑肌细胞与BD-Matrixgel基质胶溶液混合均匀得到平滑肌细胞-基质溶液，其中平滑肌细胞的密度大于1×10⁷个/mL；以2-10μL/min的流速将平滑肌细胞-基质溶液注入到微通道I(7)内，直至其充满整个微通道I(7)；

步骤12、将平滑肌细胞-基质溶液于恒温箱保持32-42℃的恒定环境中，保持10-40min后，形成具有一定弹性的基质胶凝内平滑肌细胞层(15)；

步骤13、取下阳模1#(3)，将带有进出口的盖玻片(13)与含有基质胶凝内平滑肌细胞层(15)的硅胶膜片(5)贴合形成微通道II(14)；

步骤14、配制内皮细胞密度大于1×10⁷个/mL的内皮细胞培养液，将其注入到微通道II(14)内，直至内皮细胞(16)在平滑肌细胞-基质胶表面贴附生长。

2.根据权利要求1所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，所述阳模1#(3)和阳模2#(4)高度分别为50微米和100微米，二者均为玻璃基底。

3.根据权利要求1或2所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，步骤4中负压维持在0.8-0.98bar之间，维持30-50分钟直至硅胶溶液变成无色透明。

4.根据权利要求1或2所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，步骤5中，利用等离子清洗机对阳模进行清洗，清洗时间为1-3min，清洗次数为1-2次。

5.根据权利要求3所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，步骤5中，利用等离子清洗机对阳模进行清洗，清洗时间为1-3min，清洗次数为1-2次。

6.根据权利要求1、2或5所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，步骤9中，所采用的生物试剂是纤连蛋白溶液，浓度为40μg/ml，注入纤连蛋白溶液的流速为1-2μL/min。

7.根据权利要求3所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，步骤9中，所采用的生物试剂是纤连蛋白溶液，浓度为40μg/ml，注入纤连蛋白溶液的流速为1-2μL/min。

8.根据权利要求4所述的内皮细胞-平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法，其特征在于，步骤9中，所采用的生物试剂是纤连蛋白溶液，浓度为40μg/ml，注入纤连蛋白溶液的流速为1-2μL/min。