[发明专利]一种囊泡治疗与修复细胞的方法

权利要求书

1.一种囊泡治疗与修复细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将细胞密度为90％左右的细胞置于紫外线下照射0.5～4小时，向细胞上清中加入100～500μg/mL化疗药物DOX；

2)将细胞置于37℃细胞培养箱中培养16～24小时；

3)收集细胞上清，经4℃，600～4000g离心20分钟；弃去细胞沉淀，保留细胞上清，经4℃，14000～15000g离心2分钟，进一步去掉细胞碎片；

4)将上清经4℃，15000～17000g离心60-70分钟，保留底部载药的细胞外囊泡沉淀，经PBS重悬后洗涤，放置4℃储存备用；

5)将封闭处理后的MaxiSorp酶标板与样品进行孵育，再洗涤，洗涤后MaxiSorp酶标板的孔板上结合有细胞外囊泡；

5)通过透射电镜观察胞外囊泡的形态和大小，纳米颗粒追踪分析计算胞外囊泡的平均直径；

6)将皮肤成纤维细胞接种在6孔板中，与不同浓度的胞外囊泡孵育24小时，去除培养液，按照试剂盒说明书将荧光试剂DCFH2-DA(10μM)与细胞在37℃孵育20分钟，去除试剂，然后用无血清的DMEM清洗3遍，消化下细胞进行流式分析，计算平均荧光强度，未消化的细胞在荧光显微镜下观察；

7)进行皮肤多功能成像仪检测大体皱纹情况，通过偏振光模式反应皮肤的厚度，3D粗糙度评估皮肤粗糙程度，并综合进行评分。

2.根据权利要求1所述的一种囊泡治疗与修复细胞的方法，其特征在于，所述步骤2)中的封闭处理为将MaxiSorp酶标板与1％-10％g/mL牛血清白蛋白的PBS溶液、10vt％-100vt％去除细胞外囊泡牛血清的PBS溶液和10vt％-100vt％去除细胞外囊泡人血浆的PBS溶液中的任意一种物质于室温下密闭孵育1-4h。

3.根据权利要求1所述的一种囊泡治疗与修复细胞的方法，其特征在于，所述步骤1)中紫外线强度为100～500J/m2。

4.根据权利要求1所述的一种囊泡治疗与修复细胞的方法，其特征在于，所述6孔板的接种密度为1×105个细胞/孔。

5.根据权利要求1所述的一种囊泡治疗与修复细胞的方法，其特征在于，所述不同浓度的胞外囊泡包括浓度为100ug/mL的胞外囊泡和浓度为200ug/mL的胞外囊泡。

6.根据权利要求1所述的一种囊泡治疗与修复细胞的方法，其特征在于，所述检测细胞外囊泡的试剂盒包括封闭液、洗涤液或qPCR试剂。