[发明专利]一种牙髓干细胞培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种牙髓干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，添加剂由以下原料组成：胰岛素、卟啉、金纳米棒、苦参素、小球藻生长因子、黄体酮、亚硒酸钠、谷氨酰胺。培养基中添加苦参素和小球藻生长因子可以促进细胞进行有丝分裂，提高细胞增殖活性，显著提高牙髓干细胞的增殖速度，减少细胞老化，在短时间内实现牙髓干细胞的大量扩增。添加金纳米棒增加了牙髓干细胞的贴壁性，提高细胞增殖过程的稳定性，有助于细胞保持活性。上述成分协同作用可在段时间内实现牙髓干细胞的大量扩增，为牙髓干细胞的科研及临床应用提供保障。本发明还提供了一种牙髓干细胞培养基的制备方法，在基础培养基中添加添加剂各成分制备得到，过程简便，易于操作。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种牙髓干细胞培养基及其制备方法。

背景技术

干细胞是一种能不断自我更新，具有多种发育潜能，存在于胚胎、成体器 官或组织中的未分化或分化程度很低的细胞。牙髓干细胞作为间充质干细胞的一种类型，是从成人的牙齿的牙髓组织中，分离出来的一种成体干细胞。牙髓干细胞是一种具有高度增殖和多向分化能力的间充质干细胞。牙髓干细胞除了在牙科组织工程中具有良好的应用前景，还被广泛应用在再生医疗领域。相比于胚胎干细胞，牙髓干细胞没有伦理的问题，也没有免疫排斥，不存在致瘤性等问题。所以牙髓干细胞是一种很好的潜在的临床应用细胞材料。

原代培养的牙髓干细胞多来自于智齿或者因正畸需要拔除的年轻恒牙，尽管牙间充质干细胞来源广泛，但单个个体获取的原代干细胞数量有限，牙髓中干细胞含量较低，很难满足临床细胞治疗对细胞数量的需求。因此，体外大规模的扩增培养以获得足够的细胞数量是牙髓干细胞临床应用的前提。目前牙髓干细胞培养体系主要采用含动物源胎牛血清的培养基，动物源胎牛血清在一定程度上有可能引起人体免疫排斥反应，增加了牙髓干细胞临床应用的风险。部分牙髓干细胞培养基不添加胎牛血清，但是选择添加人AB血清，如专利201710596515.6中添加了5%-10%的人AB血清，人AB血清为采用AB血型正常人血液为原料，经无菌采集、分离、微孔过滤后而成。因原料来自人血，虽然对原料血浆进行了相关病原体的筛查，并在生产工艺中加入了去除和灭活病毒的措施，但理论上仍存在传播某些已知和未知病原体的潜在风险，临床使用时应权衡利弊。因此研究一种不添加外源性血清且成分明确的牙髓干细胞培养基很有必要。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于本发明提供一种牙髓干细胞培养基，成分安全，不添加外源血清，对牙髓干细胞的增殖有明显的促进作用。

本发明的目的之二在于提供一种牙髓干细胞培养基的制备方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种牙髓干细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂由以下原料组成：胰岛素、卟啉、金纳米棒、苦参素、小球藻生长因子、黄体酮、亚硒酸钠、谷氨酰胺。

进一步地，所述添加剂各组分的终浓度为：胰岛素1-5μg/mL、卟啉1.8-2.5ng/mL、金纳米棒2.2-3.5ng/mL、苦参素8.5-10.5ng/mL、小球藻生长因子5.3-7.8 ng/mL、黄体酮5.0-7.5μg/mL、亚硒酸钠2-5μg/mL、谷氨酰胺5-10μg/mL、。

进一步地，所述添加剂中各组分的终浓度为：胰岛素3μg/mL、卟啉2.2ng/mL、金纳米棒3ng/mL、苦参素9.2ng/mL、小球藻生长因子6.4ng/mL、黄体酮6μg/mL、亚硒酸钠3.5μg/mL、谷氨酰胺8μg/mL、。

进一步地，所述基础培养基为α-MEM培养基。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述牙髓干细胞培养基的制备方法，包括以下步骤：取α-MEM培养基加入苦参素、金纳米棒、小球藻生长因子、卟啉、黄体酮、亚硒酸钠、谷氨酰胺、胰岛素，搅拌均匀，经滤膜过滤除菌，得到牙髓干细胞培养基。

进一步地，采用0.22μm的滤膜过滤除菌。