[发明专利]一种CAR-NK细胞及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202111356121.6 | 申请日： | 2021-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN114250201A | 公开（公告）日： | 2022-03-29 |
| 发明（设计）人： | 刘淑鹏;程忠平;刘琦;葛瑶 | 申请（专利权）人： | 上海市第十人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C07K19/00;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海领誉知识产权代理有限公司 31383 | 代理人： | 王琰 |
| 地址： | 200072 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 car nk 细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种CAR-NK细胞，其特征在于，所述CAR-NK细胞为在NK细胞表面表达靶向间皮素的CAR，所述CAR的结构包括特异性靶向间皮素的抗原识别区；
还包括以下(i)至(v)特征中的至少一种：
(i)CD8胞外先导序列；
(ii)来自CD8的铰链；
(iii)CD8/CD28跨膜区；
(iv)胞内段共刺激信号41BB；
(v)CD3ζ的胞浆信号传导序列。
2.根据权利要求1所述的CAR-NK细胞，其特征在于，所述CAR的结构包括如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的CAR-NK细胞，其特征在于，所述CAR-NK细胞为脐带血来源CAR-NK细胞。
4.权利要求1至3任一项所述的CAR-NK细胞的制备方法，其特征在于，所述CAR-NK细胞通过NK细胞转染表达所述CAR的载体得到。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1、利用NK磁珠分离脐带血中的NK细胞；
S2、将表达所述CAR的载体通过慢病毒感染激活NK细胞，添加IL-2用于激活；
S3、培养至约第14天收获所述细胞CAR-NK细胞。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括：使用重组人纤维蛋白片段包被非TC处理的细胞培养板和/或使用包含IL-2的SCGM培养基进行细胞培养。
7.根据权利要求4至6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述载体包含表达所述CAR结构的核苷酸序列；还包括以下(a)至(c)特征中的至少一种：
(a)所述载体的骨架为慢病毒Lenti载体；
(b)Lenti-EF1α启动子；
(c)所述CAR结构N端装载表达flag的序列。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述载体包含如SEQ ID No.2所述的核苷酸序列。
9.权利要求1至3任一项所述的CAR-NK细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为能够治疗靶向间皮素的肿瘤的药物。
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