[发明专利]一种癌细胞状态辨识基因电路组及其制备方法

权利要求书

1.一种癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，包括联用的第一辨识基因电路和第二辨识基因电路，所述第一辨识基因电路及所述第二辨识基因电路用于联用配合辨识癌细胞；

所述第一辨识基因电路至少包括依次连接的第一3'UTR段、第一启动子、条形码序列、第二启动子和第二3'UTR段；

所述第二辨识基因电路至少包括依次连接的第三3'UTR段、诱饵蛋白序列、第一荧光蛋白C端序列、PGK启动子、条形码序列、PGK启动子、捕获蛋白序列、第一荧光蛋白N端序列和第四3'UTR段；

所述第一3'UTR段、所述第二3'UTR段、所述第三3'UTR段和所述第四3'UTR段内均插入有microRNA序列，所述第一启动子、所述第二启动子及所述microRNA序列均来自所述癌细胞。

2.如权利要求1所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述第一启动子为所述癌细胞中的活跃启动子。

3.如权利要求1所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述第二启动子为所述癌细胞中的不活跃启动子。

4.如权利要求1所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述条形码序列如SEQ ID NO.1所示，所述捕获蛋白序列和所述诱饵蛋白序列其中之一如SEQ ID NO.5所示，另一个如SEQ ID NO.6所示。

5.如权利要求1所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述第一辨识基因电路还包括第二荧光蛋白序列和第三荧光蛋白序列，所述第二荧光蛋白序列设置于所述第一3'UTR段和所述第一启动子之间，所述第三荧光蛋白序列设置于所述第二启动子和所述第二3'UTR段之间。

6.如权利要求5所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述第一辨识基因电路包括依次连接的第一3'UTR段、第二荧光蛋白序列、第一启动子、条形码序列、CMV启动子、mScarlet序列、WPRE、第二启动子、第三荧光蛋白序列和第二3'UTR段。

7.如权利要求6所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述第二辨识基因电路包括依次连接的第三3'UTR段、诱饵蛋白序列、GGGs蛋白序列、第一荧光蛋白C端序列、PGK启动子、条形码序列、CMV启动子、mScarlet序列、WPRE、PGK启动子、捕获蛋白序列、GGGs蛋白序列、第一荧光蛋白N端序列和第四3'UTR段。

8.如权利要求7所述的癌细胞状态辨识基因电路组，其特征在于，所述第一荧光蛋白序列、所述第二荧光蛋白序列、所述第三荧光蛋白序列和所述mScarlet序列均不相同。

9.权利要求1-8任一项所述的癌细胞状态辨识基因电路组的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：获取癌细胞的第一启动子、第二启动子和microRNA序列；

步骤2：分别编写插入所述microRNA序列的第一3'UTR段、第二3'UTR段、第三3'UTR段和第四3'UTR段，并编写条形码序列；

步骤3：依次连接所述第一3'UTR段、第一启动子、所述条形码序列、第二启动子和第二3'UTR段，获得第一辨识基因电路；

步骤4：依次连接第三3'UTR段、诱饵蛋白序列、第一荧光蛋白C端序列、PGK启动子、条形码序列、PGK启动子、捕获蛋白序列、第一荧光蛋白N端序列和第四3'UTR段，获得所述第二辨识基因电路，在病毒载体序列中并联插入所述第一辨识基因电路和所述第二基因辨识电路，即得到癌细胞状态辨识基因电路组。

10.如权利要求9所述的癌细胞状态辨识基因电路组的制备方法，其特征在于，在所述步骤1中，所述第一启动子为所述癌细胞中的活跃启动子，所述第二启动子为所述癌细胞中的不活跃启动子。