[发明专利]一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法

权利要求书

1.一种同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，包括步骤：

配制不同浓度的氨基酸标准溶液；

将乳制品样品用微波消解仪进行消解，以将乳制品中和蛋白质结合的晚期糖基化终末产物氨基酸分子水解成游离态的氨基酸小分子，消解结束后得到消解液；

将所述消解液流经滤膜进行过滤，收集滤液，将所述滤液稀释得到经处理后的乳制品样品；

将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品分别注入液相色谱-串联质谱联用仪中进行检测。

2.根据权利要求1所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，所述氨基酸标准溶液包括溶剂和溶质，所述溶剂包括超纯水，所述溶质包括赖氨酸、糠氨酸、羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸。

3.根据权利要求1所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，所述消解的步骤包括：

将经处理后的乳制品样品和6mol/L盐酸加入微波消解罐中，向所述微波消解罐中充入氮气以排除所述微波消解罐中的氧气，将所述微波消解罐置于微波消解仪中进行消解，消解结束后得到消解液。

4.根据权利要求3所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，消解温度为150℃，消解时间为15～20min。

5.根据权利要求3所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，每1mg蛋白质当量的乳制品样品所用的盐酸为0.267mL。

6.根据权利要求1所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为0.22μm。

7.根据权利要求1所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，将所述滤液稀释得经处理后的乳制品样品的具体步骤包括：

将所述滤液用超纯水稀释100倍得经处理后的乳制品样品。

8.根据权利要求1所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，在将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品溶液分别注入液相色谱-串联质谱联用仪中进行检测的步骤中，液相色谱检测的具体过程如下：

将所述经处理后的乳制品样品置于液相色谱的进样器，流动相A、流动相B通过所述液相色谱的输液泵流经所述进样器，与所述经处理后的乳制品样品混合，混合后得到的混合液流经所述液相色谱柱，以使所述液相色谱柱对乳制品样品中的待分析氨基酸进行分离，然后通过所述的质谱检测器对所述经处理后的乳制品样品中不同的氨基酸进行检测，以得到所述经处理后的乳制样品中的不同氨基酸的色谱图；

流动相A为5mmol/L的全氟戊酸水溶液，流动相B为5mmol/L的全氟戊酸乙腈溶液。

9.根据权利要求8所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，在将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品分别注入液相色谱-串联质谱联用仪进行检测的步骤中，所述液相色谱条件如下：

流动相的流速：0.2mL/min；

进样量：2μL。

10.根据权利要求1所述的同时检测乳制品中多种晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，在将所述氨基酸标准溶液、所述经处理后的乳制品样品分别注入液相色谱-串联质谱联用仪中进行检测的步骤中，质谱检测的具体过程如下：

经液相色谱分离后的乳制品样品进入质谱，用所述质谱的电喷雾离子源将所述乳制品样品离子化，通过所述质谱的质量分析器，按离子的质荷比大小将所述离子分离成不同质量的离子，然后通过所述质谱的离子检测器对各离子进行检测，以得到所述乳制品样品中的不同氨基酸的质谱图。