[发明专利]草玉露愈伤组织高频分化培养基及草玉露愈伤组织的培养方法

权利要求书

1.一种草玉露愈伤组织高频分化培养基，其特征在于，由无机盐、有机成分、碳源、添加剂、凝固剂和激素组成，所述培养基中各组分的组成及含量如下：

无机盐：NH₄NO₃825mg/L，KH₂PO₄85mg/L，KNO₃955mg/L，MgSO₄95mg/L，CaCl₂165mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，FeSO₄·7H₂O 13.4mg/L，H₃BO₃6.2mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，KI 0.8mg/L，MnSO₄·H₂O 16.5mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.5mg/L；

有机成分：Na₂EDTA 18.5mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.51mg/L，盐酸硫胺素0.44mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，甘氨酸2mg/L；

碳源：蔗糖31g/L；

添加剂：草玉露愈伤组织提取物45-50mL/L；

凝固剂：水晶洋菜10g/L；

激素：6-BA0.5mg/L，NAA0.2mg/L；

所述草玉露愈伤组织提取物的制备方法为：选取长势良好的草玉露叶片愈伤组织，转入无菌离心管中，加入灭菌的去离子水，愈伤组织与灭菌的去离子水的质量比为1：(8-12)，在12000-15000rpm/min的转速下离心1-2min，取上清液，即为草玉露愈伤组织提取物。

2.权利要求1所述草玉露愈伤组织高频分化培养基的制备方法，其特征在于，按含量将无机盐、有机成分、碳源溶解到去离子水中，然后加入添加剂，混合均匀，得到混合液；将凝固剂用预热后的去离子水溶解后，加入到混合液中，混合均匀后调pH值为5.6-6.0，使用高压灭菌锅在121℃下灭菌20min，然后降温冷却，将激素经过0.22μm过滤器进行灭菌后，加入到降温冷却且尚未凝固的培养基中，混合均匀，即得。

3.一种草玉露愈伤组织的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)选择生长良好的草玉露叶片，采用去离子水冲洗干净后并消毒，得到无菌的外植体；

(2)在无菌条件下将外植体切割成1～2cm²的叶盘，接种到基础愈伤诱导培养基中进行诱导培养；

(3)将步骤(2)诱导出的愈伤组织在无菌条件下进行切割，得到愈伤组织块，将愈伤组织块转入权利要求1所述高频分化培养基，在无菌育种室内进行培养，得到再生植株幼苗。

4.如权利要求3所述草玉露愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，所述消毒方法为：先采用70％乙醇浸洗15s，再采用3％的NaClO溶液浸洗3min，重复2次，最后使用灭菌的去离子水冲洗3次后，用无菌滤纸吸干多余水分。

5.如权利要求3所述草玉露愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，所述基础愈伤诱导培养基配方为：MS+0.5mg/L 6-BA+1mg/L NAA+0.2mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+8g/L水晶洋菜，pH 5.7-5.8。

6.如权利要求3所述草玉露愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，诱导培养的温度为23-28℃，光照周期为12h：12h，光照强度1100Lux。

7.如权利要求3或4或5或6所述草玉露愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤(3)中，培养条件为：温度为23-28℃，光照周期为12h：12h，光照强度1100Lux。