[发明专利]环状RNA CircNFIB在肝内胆管细胞癌诊断、治疗及预后中的用途

说明书

本发明公开了环状RNA CircNFIB在肝内胆管细胞癌诊断、治疗、预后中的用途，基于发明人对环状RNA cNFIB(CircBase ID:hsa_circ_0086376)在肝胆管癌细胞生长和转移中的功能和机制研究，提供一种诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒、治疗肝内胆管细胞癌的药物组合物，以及环状RNA cNFIB作为治疗靶点在肝内胆管细胞癌的预后、诊断和治疗中的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及环状RNA CircNFIB在诊断、治疗肝内胆管细胞癌，以及肝内胆管细胞癌预后中的应用。

背景技术

肝内胆管细胞癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)是第二常见的原发性肝脏恶性肿瘤。由于非酒精性脂肪性肝病和丙型肝炎患病率的增加，肝内胆管细胞癌的发病率在全球范围内呈增长态势，过去10年平均每年增长4.4％。ICC在早期通常是无症状的，大多数患者诊断出ICC时已处于晚期，可选用的治疗手段有限，造成临床效果不佳。

当前，根治性切除仍是治愈ICC的主要手段，但60％的手术患者存在复发或转移性疾病。因此，迫切需要进一步探寻ICC转移的分子机制，确定能够抑制转移的新治疗靶点以改善ICC患者的生存结果。

环状RNA(circRNAs)是共价键形成的环形结构的非编码RNA，通常由pre-mRNA的外显子反向剪切产生。深度RNA测序和生物信息学已证明环状RNA在转录物组中大量存在。环状RNA呈封闭式的环状结构，不易被RNase R酶消化，相较于线性RNA能够更稳定地存在于生物体中。越来越多的研究证明环状RNA在肝细胞癌、结直肠癌、胶质母细胞癌、胆管癌的肿瘤发生和进展中发挥着重要的作用。从机制上讲，一些环状RNA通过吸附微小RNA或结合蛋白来调控基因表达，一些环状RNA用作蛋白质相互作用的平台，一些环状RNA可编码功能肽。但是，目前关于环状RNA在ICC转移中的作用研究甚少。

环状RNA cNFIB(CircBase ID:hsa_circ_0086376)包含基因NFIB的第3个至第6个外显子，其环化的核苷酸序列有363个碱基，目前尚未有任何关于环状RNA cNFIB在诊断、治疗肝内胆管细胞癌，以及肝内胆管细胞癌预后中应用的报道。

发明内容

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MARK)包括三个主要的亚家族：细胞外调节蛋白激酶(ERK)，c-Jun氨基末端激酶(JNK)或应激活化蛋白激酶(SAPK)，以及丝裂原活化蛋白激酶14(MARK14)。其中，ERK信号通路包括激酶RAS、RAF、MEK和ERK，是一个三层或四层的磷酸化级联，将上游信号从膜受体传递到一系列下游效应基质中。RAS/RAF/MEK/ERK通路的失调激活或者依赖性增强是包括ICC在内的许多人类癌症的共同特征。

cNFIB(CircBase ID:hsa_circ_0086376)，也即circNFIB，其cDNA序列如SEQ IDNO：1所示，cNFIB的序列如SEQ ID NO：2所示。cNFIB的结构为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列首尾连接而成的环状结构。

发明人通过机理研究发现，环状RNA cNFIB与双特异性丝裂原活化蛋白激酶1(MEK1)竞争性地相互作用，诱导了MEK1与细胞外调节蛋白激酶ERK2分解，阻碍了ERK2的磷酸化和转录活性，从而抑制了ERK信号通路和肿瘤转移。