[发明专利]鹅视网膜上皮细胞系及其构建方法与应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了鹅视网膜上皮细胞系及其构建方法与应用。该鹅视网膜上皮细胞系，名称为鹅视网膜上皮细胞GREC，于2021年9月16日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021238，目前已传至80代，形态以梭形细胞为主；病毒敏感性试验显示，该鹅视网膜上皮细胞系对禽流感病毒、法氏囊病毒、鸭呼肠孤病毒和禽腺病毒敏感；该细胞系可用于培养、分离、检测禽类病毒，制备禽类疫苗，筛选用于预防或治疗禽类病毒感染所致的疾病的药物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及鹅视网膜上皮细胞系及其构建方法与应用。

背景技术

近年来，国内外禽病频频发生，在各类禽病中，传染性疾病仍是危害禽类养殖业最为严重的疾病，其中尤以病毒性传染病为甚，如H5、H7和H9等亚型禽流感为代表的高致病性禽流感对禽类养殖造成了严重影响。H5N6禽流感病毒是禽流感病毒的一种新亚型，是禽流感病毒H5N1和H6N6重配后“生”出来的流感病毒，对家禽具有高致病性。此外，在养鸡业中，鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性法氏囊、鸡传染性关节炎频发，养鸭业中较为流行的鸭细小病毒病、鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病，以及鸭副粘病毒病等新型疫病也严重制约着畜禽业的发展。

疫苗免疫是目前有效预防禽病大流行的手段，国内禽类疫苗的生产主要依靠传统的“鸡胚法”工艺实现。该工艺培养周期长、操作步骤繁琐、生产成本高，大规模生产时存在鸡胚质量不稳定及潜在外源病毒污染问题，收获完成后废胚难以无害化处理，存在病毒扩散风险和污染环境问题。因此，传代细胞系取代鸡胚生产疫苗是大势所趋。随着细胞培养技术的不断发展，细胞基质成为病毒疫苗研发的重要材料。现有报道与研究用于疫苗生产的成熟细胞系，包括Vero，MDCK，Marc145等哺乳类动物细胞，然而，现有的细胞源细胞疫苗主要采用异源细胞作为细胞基质进行生产，免疫原性较差。

目前禽类细胞的研发与成果较少，尚无商品化的鹅源细胞系。而鸭和鹅类病毒的分离多是通过鹅胚或番鸭胚来分离，但是由于目前国内外尚无商品化的无特定病原体(Specific pathogen Free,SPF)鹅胚和番鸭胚，用其分离鹅病毒存在内源病毒干扰等情况，影响病毒的分离。为了更好有效的分离到鸭类和鹅类病毒，及早检测出病毒，预防疾病爆发，许多国内外的学者都在进行禽源细胞系的研究。因此，分离禽类原代细胞，建立可永生化的细胞系，成为突破细胞源疫苗生产的关注点。现在急需建立一株能够稳定快速传代的鹅视网膜上皮细胞系，并应用到多种禽类病毒上。

发明内容

本发明第一方面的目的，在于提供一种鹅视网膜上皮细胞系。

本发明第二方面的目的，在于提供第一方面的鹅视网膜上皮细胞系的构建方法。

本发明第三方面的目的，在于提供第一方面的鹅视网膜上皮细胞系的应用。

本发明第四方面的目的，在于提供一种培养禽类病毒的方法。

本发明第五方面的目的，在于提供一种禽类疫苗的制备方法。

本发明第六方面的目的，在于提供一种禽类疫苗。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供一种鹅视网膜上皮细胞系，名称为鹅视网膜上皮细胞GREC，于2021年9月16日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021238。