[发明专利]缺失十个基因的减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用有效
| 申请号： | 202111334156.X | 申请日： | 2021-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN114015660B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 郑海学;冯涛;马昭;刘华南;李攀;石正旺;申超超;吴盼雪;齐晓兰;张克山;李丹;党文;杨波;王琦;曹丽艳;朱紫祥;田宏;郭建宏;刘湘涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N7/04;C12N15/34;C12N15/85;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 毛婷 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 缺失 十个 基因 非洲 猪瘟 病毒 构建 及其 作为 疫苗 应用 | ||
1.通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中联合缺失基因片段制备减毒非洲猪瘟病毒株的应用，其特征在于，所述基因片段为II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018全长序列的第24164-35631位和第174625-174718位；所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。
2.通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中联合缺失基因片段制备非洲猪瘟疫苗的应用，其特征在于，所述基因片段为II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018全长序列的第24164-35631位和第174625-174718位；所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。
3.一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为基因片段缺失的II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018；所述基因片段为II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018全长序列的第24164-35631位和第174625-174718位；所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。
4.一种非洲猪瘟疫苗，其特征在于，所述非洲猪瘟疫苗包括权利要求3所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株。
5.一种制备权利要求3所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的方法，其特征在于，所述的方法是通过基因工程手段将II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018全长序列的第24164-35631位和第174625-174718位序列缺失。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法为同源重组技术。
7.一种制备权利要求3所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）选取MGF-360-9L基因上游序列和MGF-505-3R基因下游序列作为左右同源重组臂，将所述左右同源重组臂基因与mCherry基因筛选表达盒基因片段p72-mCherrry-BGH polyA同时克隆至pUC57载体，获得重组质粒pM9-mCherry；
（2）选取I177L基因上下游序列作为左右同源重组臂，将所述的左右同源重组臂与eGFP基因筛选表达盒基因片段p72-eGFP-SV40polyA同时克隆至pUC57载体，获得重组质粒pI177L-eGFP；
（3）将重组质粒pI177L-eGFP和重组质粒pM9-mCherry分别转染至感染了ASFV原始毒株的BMDM细胞，纯化筛选获得I177L基因与MGF-360-9L基因、MGF-360-10L基因、MGF-360-11L基因、MGF-505-1R基因、MGF-360-12L基因、MGF-360-13L基因、MGF-360-14L基因、MGF-505-2R基因、MGF-505-3R基因联合缺失的减毒非洲猪瘟病毒ΔI177L/M9。
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