[发明专利]用于鉴别烟草尼古丁含量高低的分子标记nicas1及其试剂盒与应用

权利要求书

1.用于鉴别烟草尼古丁含量高低的分子标记Nicotine Associated SNP 1，其特征在于，为位于烟草基因组版本Nitab v4.5 Genome Scaffolds Edwards2017的第0002539号基因组片段第95304位的SNP位点Nitab4.5_0002539:95304A/G。

2.根据权利要求1所述的用于鉴别烟草尼古丁含量高低的分子标记NicotineAssociated SNP 1，其特征在于，所述用于鉴别烟草尼古丁含量高低的分子标记NicotineAssociated SNP 1的特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.用于鉴别烟草尼古丁含量高低的试剂盒，其特征在于，包括：分子标记NicotineAssociated SNP 1；所述分子标记Nicotine Associated SNP 1为位于烟草基因组版本Nitab v4.5 Genome Scaffolds Edwards2017的第0002539号基因组片段第95304位的SNP位点Nitab4.5_0002539:95304A/G。

4.根据权利要求3所述的用于鉴别烟草尼古丁含量高低的试剂盒，其特征在于，还包括：分子标记Nicotine Associated SNP 1的特异性引物；和/或，所述分子标记NicotineAssociated SNP 1的特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

和/或，所述试剂盒还包括：用于PCR的试剂、用于测序的试剂、和/或，用于KASP基因分型检测的试剂；

和/或，所述用于PCR的试剂包括：dNTPs、Taq酶、PCR缓冲液、ddH₂O；

和/或，所述用于测序的试剂包括：Tris-HCl、琼脂糖、EB；

和/或，所述KASP基因分型检测的试剂包括：KASP Master mix。

5.一种鉴别烟草尼古丁含量高低的方法，其特征在于，采用分子标记NicotineAssociated SNP 1对待测烟草材料进行筛选；所述分子标记Nicotine Associated SNP 1位于烟草基因组版本Nitab v4.5 Genome Scaffolds Edwards2017第0002539基因组片段第95304位的SNP位点Nitab4.5_0002539:95304A/G。

6.根据权利要求5所述的一种鉴别烟草尼古丁含量高低的方法，其特征在于，包括：采用所述分子标记Nicotine Associated SNP 1的特异性引物对待测烟草材料的DNA进行PCR扩增；所述分子标记Nicotine Associated SNP 1的特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；

和/或，所述一种鉴别烟草尼古丁含量高低的方法还包括：所述PCR扩增产物进行测序或KASP基因分型检测；

和/或，测序结果或KASP检测结果显示SNP位点基因型为GG对应的待测烟草材料为尼古丁含量低的烟草材料；

测序结果或KASP检测结果显示SNP位点基因型为AA对应的待测烟草材料为尼古丁含量高的烟草材料；

和/或，所述PCR扩增的反应体系包括：

模板0.02μL/μL、正向引物0.02μL/μL、反向引物0.02μL/μL、5×buffer 0.2μL/μL、dNTPmixture 0.02μL/μL、DNA聚合酶0.02μL/μL、其余为水；

PCR扩增的反应程序包括：98℃5min；以98℃30s、58℃30s、72℃30s为1个循环，共35个循环；72℃5min；

和/或，所述待测烟草材料的DNA提取自烟草的叶片、种子、根、茎、花、或果实。