[发明专利]一种抗CD16和CEA抗原的双特异性抗体

说明书

本发明公开了一种抗CD16抗原的纳米抗体，以及含有两种VHH结构域的双特异性抗体。所述抗CD16抗原的纳米抗体具有独特的3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3。所述双特异性抗体由两条不同序列的重链融合而成，分别识别NK细胞表面的CD16抗原和癌胚抗原CEA。且该双特异性抗体能够显著增强抗体介导的NK细胞杀伤肿瘤靶细胞的活性。

技术领域

本发明公开了一种多肽，更具体地，公开了一种抗体，属于免疫学领域。

背景技术

癌胚抗原(CEA，又称为CEACAM-5或CD66e)是一种具有约180kDa分子量的糖蛋白。CEA是免疫球蛋白超家族的一名成员，并且含有经由糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚与细胞膜连接的7个域。7个域包括单一N端Ig可变域和与Ig恒定域同源的6个域(A1-B1-A2-B2-A3-B3)。CEA最初分类为仅在胎儿组织中表达的蛋白质，现在已经在几种正常成年组织中鉴定出。CEA的过量表达在许多类型的癌症中观察到，包括结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、肝细胞瘤、乳腺癌和甲状腺癌。因此，CEA已经被鉴定为肿瘤相关抗原。CEA容易自细胞表面切割，并直接或经由淋巴系统自肿瘤脱落入血流中。由于此特性，已经使用血清CEA的水平作为临床标志物以诊断癌症并筛选癌症。而且，CEA也已被用作肿瘤标记，测量癌症患者血液中升高的CEA的免疫学测定法已在临床上用于癌症的预后和控制。

更重要的是，CEA已成为用于靶向治疗的肿瘤相关抗原。已经报道的使用CEA靶向免疫治疗癌症主要有2种方法。一种方法是使用抗CEA抗体引发免疫细胞的溶解活性，特别是通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)，以消除表达CEA的肿瘤细胞。另一种方法是通过抗CEA抗体或抗体片段与药物、毒素、放射性核苷酸、免疫调节剂或细胞因子等效应分子缀合，特异性靶向表达CEA的肿瘤细胞，从而发挥效应分子的治疗作用。我们都知道，自然杀伤细胞(natural killer，NK cells)是机体具有细胞毒性的免疫细胞之一，表达CD56和CD16，在肿瘤的免疫治疗中发挥抗肿瘤效应。NK细胞可以在未致敏的情况下，具有很强的杀伤肿瘤细胞和病毒感染性细胞的活性。一个NK细胞可以裂解体积超过其几倍的肿瘤细胞。最近的研究表明，与活化的T淋巴细胞不同，NK细胞更倾向于杀伤肿瘤干细胞[Ames E，Canter RJ，Grossenbacher SK，et al.NK cells preferentially targettumor cells with a cancer stem cell phenotype.The Journal of Immunology，2015,195(8):4010-4019]。NK细胞在肿瘤的免疫治疗中发挥抗肿瘤效应的重要机制之一就是ADCC作用。而CD16分子就是NK细胞启动ADCC效应过程中不可或缺的条件，在许多基于抗CD16抗体的肿瘤治疗中，由于只能特异性连接一个抗原靶点，其特异性相对较低，易产生脱靶效应。

双特异性抗体是近几年发展起来的一种抗体技术，可以同时识别2种不同的抗原。利用双特异性抗体，可以研发同时针对肿瘤细胞和NK细胞的双特异性抗体，在识别肿瘤细胞抗原，中和肿瘤细胞标志物从而阻断其诱导肿瘤细胞增殖等效应的同时，识别免疫细胞，将免疫细胞引导到肿瘤细胞的附近，加强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，如CEA抗原和NK细胞的CD16抗原。