[发明专利]特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原、多克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原、多克隆抗体及其制备方法，该特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原包括氨基酸序列如SEQ ID No.1或氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，且在特定组氨酸π位的N上甲基化修饰的多肽；通过该特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原免疫动物可获得特异性识别特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白的多克隆抗体，实现快速简易地检测生物样品中S1000A9特定组氨酸甲基化的变化，推动研究特定组氨酸甲基化S100A9蛋白(或钙卫蛋白)的功能影响以及特定生命活动或炎症发生过程中S100A9(或钙卫蛋白)特定组氨酸甲基化动态变化的发展。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原，还涉及一种可特异性识别特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白的多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

S100A9蛋白属钙结合蛋白S100蛋白家族成员，其高表达于中性粒细胞和单核细胞中国，通常与S100A8通过化学结合形成异二聚体发挥作用，其主要功能是抑制酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ的活性，故S100A8/S100A9也被合称为Calprotectin(CP，钙卫蛋白)。

钙卫蛋白广泛分布在人体细胞、组织以及体液中，它是粒细胞、单核细胞和角质细胞的主要蛋白质，其表达具有组织或细胞特异性，可作为急性炎性细胞活化的标志物。具体的说，嗜中性粒细胞钙卫蛋白分布在溶酶体外的细胞液中，约占细胞总蛋白的50％，可为中性粒细胞更新的标志物，在许多炎症情况下升高，它可以在血浆、尿液、粪便、脑脊液、唾液、滑膜液以及结肠活检中被检测。

甲基化作为一种增加所修饰残基特征的生物化学策略，通常被细胞用于识别和调控。提及蛋白质甲基化，本领域较为熟知的是赖氨酸或精氨酸甲基化；事实上，蛋白质组氨酸也可以发生甲基化。已有研究发现，人源S100A9(Swiss-Prot：P06702)蛋白上第105位组氨酸以及鼠源S100A9(Swiss-Prot：P31725)蛋白上第107位组氨酸被鉴定有甲基化修饰，其中，人源S100A9蛋白第105位组氨酸或鼠源S100A9蛋白第107位组氨酸的甲基化可以由组氨酸N1位甲基化转移酶METTL9介导，由于METTL9修饰底物偏好一定的基序XHXH，第二个H是被METTL9甲基化的位点；而S100A9上就有这样的基序，通过反应，METTL9就能把甲基供体SAM上的甲基转移到人源S100A9上105位或鼠源S100A9上第107位组氨酸的第一位的N原子上，从而达到甲基化修饰S100A9蛋白的目的。

但针对上述特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白的具体功能还没有被研究，针对其特定组氨酸甲基化修饰位点的特异性抗体也没有。而目前鉴定S100A9上组氨酸甲基化的手段只能通过质谱的方式，但质谱技术要求的平台比较复杂，一般实验室不具备这样的条件；另外，质谱手段整个流程对样品的处理时间长，得出的结果也不能直观地呈现出来。

发明内容

有鉴于此，本发明有必要提供一种特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原，该特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原可通过免疫动物获得一种多克隆抗体，该多克隆抗体可特异性识别特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白，从而实现S100A9上特定组氨酸甲基化的鉴定，可极大地简化整个检测过程，缩短检测时间，并直观地呈现检测结果。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明首先提供了一种特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原，包括氨基酸序列如SEQ ID No.1或氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的多肽，且所述多肽在特定组氨酸π位的N上甲基化修饰。

进一步方案，所述特定组氨酸甲基化修饰的S100A9免疫原还包括载体蛋白，所述载体蛋白与所述多肽偶联。

进一步方案，所述载体蛋白选自血蓝蛋白。