[发明专利]壳聚糖-Pickering乳液白细胞介素12佐剂体系的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及免疫学领域，具体涉及壳聚糖‑Pickering乳液白细胞介素12佐剂体系的制备方法及其应用；将壳聚糖与水混合得到水相；其水相于油相液体石蜡混合、超声得到壳聚糖‑Pickering乳液。将壳聚糖‑Pickering乳液与IL‑12结合形成佐剂，所述的佐剂再与pORF5形成疫苗；本发明人提供了一种壳聚糖‑Pickering乳液/IL‑12佐剂体系与沙眼衣原体重组蛋白制备为疫苗制剂，实验证实壳聚糖‑Pickering乳液/IL‑12佐剂体系增强抗原的体液免疫和细胞免疫水平优于不含佐剂或者单独佐剂。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体涉及Pickering乳液白细胞介素12佐剂体系在制备沙眼衣原体疫苗中的应用，即一种沙眼衣原体重组亚单位疫苗优选一种壳聚糖-Pickering乳液/IL-12佐剂体系混合制备的沙眼衣原体疫苗制剂、其制备方法、及其在防治沙眼衣原体感染中的应用。

背景技术

沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，Ct)作为一种革兰阴性专性胞内寄生菌，是世界上最常见的性传播病原体之一，可感染人眼部，呼吸道和生殖道系统，引起眼部瘢痕、失明，男性尿道炎、直肠炎，女性宫颈炎、盆腔炎、异位妊娠甚至不孕等疾病，严重危害人类健康。Ct感染常伴有其它病原体如人乳头瘤病毒(HPV)、艾滋病病毒(HIV)的混合感染，并能够促进HPV、HIV的传播和感染，导致宫颈癌、艾滋病的发生。目前在全球范围内沙眼衣原体感染病例稳步上升，特别是给发展中国家带来了严重的公共卫生负担，且沙眼衣原体感染性疾病还没有一种有效的防治方法，感染沙眼衣原体后也常常无症状不能及时诊断和治疗，治疗后也极易复发。因此，寻求有效疫苗是预防和控制沙眼衣原体感染的根本措施。

Ct疫苗分为全菌疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、重组亚单位疫苗和核酸疫苗。早期的动物实验表明无毒的全菌疫苗可产生有效的保护性免疫，但可能会毒力返祖，且大量繁殖和冷藏条件都显示全菌疫苗存在较大的安全性问题，因此疫苗研究转向了安全性较高的减毒活疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗。亚单位疫苗研究研究已有十余年，其安全性高不含毒性成分但存在蛋白质提取、纯化困难，成本高昂等问题。重组亚单位疫苗是近几年较为热门的方向，借助DNA重组和蛋白质工程技术可以表达大量的蛋白疫苗，因此重组亚单位疫苗有着安全性高，成本节约等优越性，但激发高效的特异性免疫反应特别是抗Ct细胞免疫和黏膜免疫还远远不够，因此优选一种靶向蛋白疫苗激发细胞免疫和体液免疫的佐剂可以起到事半功倍的效果。

目前已批准使用的佐剂有铝佐剂、油乳佐剂(MF59、ASO2、AS03、AF03)、Toll样受体激动剂类等，其它佐剂如病毒样颗粒、脂质体、免疫刺激复合物、寡核苷酸类、纳米颗粒、多糖类、细胞因子类等可改善多种免疫类型，但目前均尚未实现临床应用。铝佐剂已经广泛应用于疫苗，然而这种传统佐剂只能激发体液免疫无法诱导产生理想的细胞免疫和黏膜免疫反应对胞内病原体有一定的局限性。乳液佐剂也是一种广泛使用的佐剂类型，具有以下优点：1.保护、缓释抗原，2.增加抗原吸附表面积，3.调节免疫应答类型，4.成本节约可大规模生产。但也存在问题如使用表明活性剂等带来安全稳定隐患，免疫剂量、方法和具体免疫增强的机制还未阐明。