[发明专利]青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用

说明书

本发明公开了青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，所述人黑色素瘤细胞损伤为人黑色素瘤细胞氧化应激损伤。所述青龙衣提取物的提取方法如下：干燥青龙衣，粉碎，乙醇热回流提取，合并提取液，减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液减压浓缩至干燥，分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。以不同浓度H₂O₂作用不同时间来诱导A375细胞氧化损伤，从DPPH、ABTS自由基的清除率检测抗氧化活性。

技术领域

本发明涉及提取青龙衣中的化学成分的技术领域，更具体的说是涉及青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用。

背景技术

青龙衣Green wulnut husk是胡桃科植物落叶乔木胡桃楸，果实的未成熟青色外果皮，又被称为核桃青皮，始载于《开元本草》，其镇痛、治疡功效在《山东中草药手册》、《救急方》等医药典籍中早有记载，民间也有将其泡水饮用起止痛之效的应用。现代研究表明，青龙衣中含有丰富的化学成分，包括醌类、黄酮类、二芳基庚烷类、酚酸类等，具有良好的抗菌、抗肿瘤、镇痛等多种药理活性。

核桃青皮一直被当做废弃物或者燃料，对环境带来了较大的压力和污染，农民收获核桃时，处理核桃青皮时手上会留下难以洗去的黑灰色印记，难以洗净。核桃盛产区域产生大量的核桃青皮堆积，堆积的果皮会产生难闻气味，产生有害液体，对人体、农作物等产生影响。因此，加大核桃青皮的开发和利用成为促进核桃产业进一步发展的重要问题。

近年来，氧化应激学说备受关注。氧化应激是指人体内氧化与抗氧化作用的不平衡，导致人体产生大量的氧化中间产物。M Eskandani等人研究表明氧化应激水平和酪氨酸酶活性呈负相关，酪氨酸酶活性可调节皮肤黑色素细胞产生黑色素。Schallreuter等人研究表明白癜风患者的表皮细胞中含有H₂O₂，白癜风患者与H₂O₂水平较高有关，氧化应激失衡产生的氧化物可以使黑色素细胞受到损伤，导致黑色素生成量减少，进而患白癜风等疾病。因此，抗氧化剂治疗已成为白癜风的有前途的治疗方向。

本发明为进一步探究青龙衣抗氧化损伤活性，对青龙衣提取物的不同极性萃取物进行体外细胞抗氧化损伤活性研究与清除DPPH、ABTS自由基能力做出评价。因此，提供青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，采用H₂O₂诱导A375细胞氧化损伤模型，研究核桃青皮乙醇提取物的不同极性萃取物抗氧化作用，筛选出主要抗氧化作用的有效部位，为开发治疗白癜风疾病的药物和天然的食品抗氧化剂提供参考依据。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，所述人黑色素瘤细胞损伤为人黑色素瘤细胞氧化应激损伤。

优选的，所述青龙衣提取物的提取方法如下：

干燥青龙衣，粉碎，用体积分数70％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，旋转蒸发仪50℃减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液减压浓缩至干燥，分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。

优选的，所述二氯甲烷萃取物的提取方法如下：干燥青龙衣，粉碎，用体积分数70％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，旋转蒸发仪50℃减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，AB-8树脂柱上样，95％乙醇：二氯甲烷＝1：1洗脱，回收洗脱液旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到二氯甲烷萃取物。