[发明专利]一种通过Telocytes对肝细胞癌的预后评价方法

说明书

本发明涉及临床医学技术领域，尤其涉及了一种通过Telocytes对肝细胞癌的预后评价方法，包括以下步骤：取肝细胞癌患者术后肿瘤标本，在距肿瘤1‑2cm范围内的癌细胞旁组织，做成冰冻切片或石蜡切片，应用CD34（高度糖基化的I型跨膜糖蛋白）/CD117（Ⅲ型跨膜醅氨酸激酶受体蛋白）/PDGFR（血小板衍生生长因子受体）/vimentin（波形纤维蛋白）指标做免疫荧光染色，以CD34+/CD117+/PDGFR+/vimentin‑细胞为TCs细胞，将癌旁组织放入电镜通用固定液中，切片后于透射电子显微镜下观察TCs细胞的形态。该通过Telocytes对肝细胞癌的预后评价方法，采用多组双免疫荧光标记，通过对细胞形态与端粒数目进行观察，可以为临床医师提供患者预后评价的准确指标，解决了为肝细胞癌患者预后评价指标可能性的问题。

技术领域

本发明涉及临床医学技术领域，具体为一种通过Telocytes对肝细胞癌的预后评价方法。

背景技术

Telocytes（TCs）作为新型的间质来源的细胞，广泛存在于人类器官和组织中，参与多种生理、病理过程，如参与组织修复，心脏缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化，和肿瘤发生等。在人类肝脏组织中，TCs对CD34、PDGFR-α和CD117阳性表达，对波形蛋白（Vimentin）和CD28阴性表达，其参与疾病发生、发展的过程被称为“Telocytopathies”。

TCs可作为促瘤因素参与炎性结肠息肉和PDGFR-A变异型结肠疾病的发生和发展；TCs还可与周围细胞之间传递信息参与肺部多种疾病过程。申请人在前期研究中发现，TCs在肝细胞癌癌旁组织中的高表达与患者预后生存期具有相关性，TCs低表达患者具有更长的生存期，且通过多条信号通路研究TCs促进肝细胞癌侵袭转移的内在机制。因此将TCs在肿瘤癌旁病理组织中的表达情况作为预测患者生存预后的指标具有一定的科学性和实用性。

在肿瘤病理组织中，统计计数TCs的数量需要通过免疫组化或免疫荧光指标进行染色，并通过透射电镜进行细胞形态的识别，此过程需要成本较高，观察时间较长。

发明内容

（一）解决的技术问题

肝细胞癌手术治疗是患者可能取得无瘤生存状态的唯一有效方式，患者术后是否需要接受化疗，放射治疗或免疫靶向治疗，需要病理分子生物学指标的综合评价，除病理分期和细胞增殖指标外，没有其他可以为临床医师提供患者预后评价的准确指标，基于现有技术的这一缺陷，本发明提供了一种通过Telocytes对肝细胞癌的预后评价方法，具备可以为临床医师提供患者预后评价的准确指标的优点，解决了为肝细胞癌患者预后评价指标可能性的问题。

（二）技术方案

为实现上述为肝细胞癌患者预后评价指标可能性目的，本发明提供如下技术方案：一种通过Telocytes对肝细胞癌的预后评价方法，包括以下步骤：

S1：取肝细胞癌患者术后肿瘤标本，在距肿瘤1-2cm范围内的癌细胞旁组织，在室温液体溶剂中利用高速破碎、高速研磨、高速搅拌和超分子渗透技术，快速对癌细胞旁组织进行破碎、研磨至细微颗粒，提取形态完整的组织细胞，将癌细胞旁组织细胞固定在4%的多聚甲醛缓冲液中，石蜡包埋在JB-P5型石蜡包埋机中并存档，然后用RM2016型病理切片仪制备3μm厚的组织切片。切片用二甲苯一式三份(每次15min)，纯乙醇脱水2次(每次5min)，乙醇梯度为85%和75%(5Min)，切片在柠檬酸钠抗原提取液(ServiceBio：G1202，pH为6.0)中孵育次，用PBS(Servicebio：G0002，pH为7.4)在摇床上浸泡5min，目的组织用液体阻滞剂PEN标记，在室温下浸泡3%BSA溶液中30min，做成冰冻切片或石蜡切片；

S2：应用CD34（高度糖基化的I型跨膜糖蛋白）/CD117（Ⅲ型跨膜醅氨酸激酶受体蛋白）/PDGFR（血小板衍生生长因子受体）/vimentin（波形纤维蛋白）指标做免疫荧光染色；

S3：以CD34+/CD117+/PDGFR+/vimentin-细胞为TCs细胞；