[发明专利]一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法

权利要求书

1.一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：生物样品进行前处理后，使用液相色谱-三重四极杆串联质谱仪实现待测物葡聚糖组分的分离及定量分析；液相色谱条件：超高效液相色谱系统；XAmide色谱柱；酸性乙腈/水流动相；梯度洗脱；质谱采集模式为离子源内裂解结合多反应监测模式；利用葡聚糖源内裂解产生的特异性碎片离子m/z649.3以及该碎片离子碰撞诱导裂解产生的特征性寡糖离子碎片离子m/z 325.1进行生物样品中葡聚糖的定量分析；ESI离子化源；正离子检测模式。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：质谱条件：Sciex TRIPLEQUAD 6500 plus型串联质谱仪。

3.根据权利要求2所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：色谱条件：ACCHROM XAmide色谱柱；流速1 mL/min；柱温为40±10 °C；进样量为2-10 μL；每针运行时间为15±5 min；质谱条件：离子喷射电压4500±500 V；温度400±50 ℃；源内气体1：氮气压力30±5 psi；气体2：氮气压力20±5 psi；气帘气体：氮气压力20±5 psi；解簇电压：300±50 V；碰撞能量20±5 eV。

4.根据权利要求3所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：该方法检测浓度范围为0.5-100 μg/mL，LLOQ为0.5 μg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：所述生物样品为血浆、尿液、胆汁、粪便、组织样本中任意一种。

6.根据权利要求5所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：当生物样品为血浆时，前处理为：经抗凝剂处理得到的血浆，沉淀蛋白、离心、取上清液稀释；当生物样品为粪便时，前处理为：冷冻干燥、粉碎、复溶涡旋离心、取上清液，沉淀蛋白、离心、上清液稀释；当生物样品为尿液或胆汁时，前处理为：沉淀蛋白、离心、取上清稀释；当生物样品为组织时，前处理为：组织经酶解后，进行沉淀蛋白和离心稀释步骤。

7.根据权利要求6所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：当生物样品为血浆时，所用抗凝剂为柠檬酸钠。

8.根据权利要求6所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：沉淀蛋白试剂为含有0.03%甲酸的甲醇溶液。

9.根据权利要求6所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：当生物样品为组织时，组织酶解采用淀粉酶和糖化酶的双酶组合。

10.根据权利要求9所述的一种定量检测生物样品中葡聚糖的方法，其特征在于：组织先经100 ug/mL淀粉酶酶解，40 ℃水浴震荡30 min，用乙酸调整pH 至4.5±1，再使用糖化酶酶解，60 ℃水浴震荡30 min。