[发明专利]一种电化学发光微流控检测芯片及用于蛋白检测的试剂盒

说明书

本发明公开了一种电化学发光微流控检测芯片及用于蛋白检测的试剂盒。本发明提供了一种电化学发光微流控检测芯片，包含叠置的芯片上盖、单面胶电极层、双面胶流道层和芯片下盖；芯片上盖包含加样区；芯片下盖设有凹槽及开口槽；单面胶电极层包含单面胶层加样区，单面胶电极层在与芯片上盖接触的一侧表面设置有胶层，在与双面胶流道层接触的一侧表面设置有多个电极，电极包括工作部分及导出部分；双面胶流道层包含样本流动通道及开槽，开槽位于样本流动通道的末端处；样本流动通道包括加样孔区、流道检测区和废液槽区。本发明提供的电化学发光微流控检测芯片适于超高灵敏度、精密度的即时检验。

技术领域

本发明属于电化学发光检测技术领域，涉及一种电化学发光微流控检测芯片及用于蛋白检测的试剂盒。

背景技术

心肌肌钙蛋白(Cardiac Troponin,cTn)是目前诊断心肌梗死(Acute MyocardiacInfarction，AMI)和对急性冠状动脉综合征(ACS)危险分层的黄金标志物。传统的cTn检测方法灵敏度、精密度相对不高，难以被检测发现，基本无法在表面健康人群中检测出来，在缺血症状或心电图改变不典型时，这有可能导致延迟诊断甚至误诊，不利于早期诊断、风险评估和预后判断。

根据《高敏感方法检测心肌肌钙蛋白临床应用中国专家共识》中提到，高敏心肌肌钙蛋白(hs-cTn)的定义需要满足2个条件：①正常人群的第99百分位值处的变异系数＜10％；②在健康人群中，低于第99百分位值的检出率要超过50％(最佳状态＞50％)。hs-cTn需要更高的灵敏度和精密度。传统心肌肌钙蛋白免疫分析的灵敏度只能达到100ng/mL(μg/L)左右的级别，而高敏免疫分析的灵敏度需要高达10ng/L甚至更低。目前市场上已有多种检测心肌肌钙蛋白的诊断试剂。从技术上来看，主要有免疫层析法、酶联免疫法、化学发光法和电化学发光法等为主的技术平台。其中免疫层析法难以克服其本身基材的固有缺陷，如硝酸纤维素膜对蛋白固定能力有限、手工组装步骤繁琐等因素带来的人为误差导致精密度较大、灵敏度较低等缺点，在实际临床检验中存在很多问题。酶联免疫法成熟度较高，但操作复杂、检测时间长，对操作者有一定技术要求，该方法逐渐被取代。化学发光法和电化学发光法的优点是定量精确，灵敏度和特异性高，检测范围宽，便于实现高通量自动化，是中心实验室最常用的检测方法，但这种检测仪器昂贵，且占地比较大，不适用于在急诊、ICU、胸痛中心等科室的使用。

专利文献1：CN106807461A公开一种用于荧光免疫检测的微流控芯片及其制备方法，其包括芯片基板，基板上开设微流控通道，微流控通道包括依次连通的样本滴加区、全血过滤区、抗体包被区、反应区、检测区、质控区和废液收集区，全血过滤区设有红细胞滤血膜。检测时，在离心力驱动下，全血样本经过过滤区去除血细胞随后进行检测。该方案一方面全血过滤膜分离时会带来检测干扰和样本浪费，另一方面蛇形管道状的反应区很容易残留样本，对检测灵敏度产生不利的影响。此外，直接在基板上开设通道的制备方法加工成本较高，且单纯用离心力控制液体可能液体流速过快，不利于层析反应的进行。

专利文献2：CN108414769A公开了一种用于心衰标志物检测的蛋白芯片，蛋白芯片的制备方法包括(1)黑玻片预处理；(2)抗体溶液点样；(3)封闭工艺制得所述蛋白芯片。该发明实现联合检测心肌标志物芯片诊断试剂盒。黑玻片要在NaOH预处理液中浸泡16～24h，纯化水清洗2～8次，再硅烷水溶液中浸泡20～60min。处理工序非常复杂，费时费工，产生大量废水，不利于环保。且处理批次之间差异大，不利于批量化生产，同时也导致了芯片生产成本较高。

专利文献3：CN105259162A公开了一种定量检测全血中脑钠肽的磁微粒化学发光微流控芯片，其由顶部胶带、芯片基板和底部胶带构成，其中芯片基板上的过滤区、磁颗粒标记BNP抗体包被区、反应区、清洗区、检测区、流体释放通道依次连接。该方法中采用抗体修饰的磁颗粒，制备方法相对复杂，微流控芯片在检测中需要设备电磁铁牵引芯片中磁颗粒运动，对设备复杂性要求高。此外，过滤区包含滤血膜，也会存在检测干扰和样本浪费等问题。