[发明专利]一种可扩增间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法

说明书

本发明属于检测领域，具体涉及一种可扩增间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法。主要含有姜黄素、千金藤碱、小檗碱、白藜芦醇、花青素、骨形态蛋白4，β‑甘油磷酸、胆固醇、异丁甲基黄嘌呤、EGF、生物素、aFGF、肝素钠、还原型谷胱甘肽、转铁蛋白、胰岛素、抗坏血酸、地塞米松、白介素2、维生素B12、白介素6、干细胞因子、烟酰胺、TGF‑β3、血小板生成素、牛磺酸、罗格列酮、FMS样酪氨酸激酶3配体、IGF2、丙酮酸钠、GM‑CSF和TPO等组分，该无血清培养基不仅具备体外扩增来源于脂肪、胎盘、骨髓、脐带间充质干细胞的能力，还可保持干细胞自我更新、防止其分化，抑制其癌变。

技术领域

本发明属于检测方法领域，具体涉及一种可扩增间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymaLstemceLLs，MSCs)是一种成体干细胞，具有高度的自我更新、多向分化潜能、低免疫原性、来源丰富等诸多优点，因此得到组织工程和再生医学的高度重视与青睐，是目前再生医学中常用的细胞。

MSCs来源于骨髓、外周血、脐带血、胎盘等组织，是一类具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。在不同的诱导条件下，其可分化为多种组织细胞，并具有造血支持、免疫调节、组织修复等作用，它可分泌多种细胞因子及生长因子，促进造血干细胞的增殖与分化。MSCs还具有免疫调节、抗炎、组织修复作用，可减轻移植物抗宿主病及其他移植相关并发症。

干细胞治疗目前在全球开展了多项临床试验，覆盖140多种疾病，其中包括不同种干细胞类型及多种疾病类型，主要包括心脑血管疾病、骨科疾病、神经系统疾病、呼吸系统疾病、肝病、风湿免疫病、免疫排斥等，是治疗多种疾病的种子细胞。2015年7月31日，国家卫生计生委办公厅、国家食品药品监管总局办公厅发布的《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则(试行)》中指出，MSCs制剂作为一种新型生物治疗产品，其在细胞质量、安全性和生物学效应方面都应进行全面的研究及质量控制。

间充质干细胞的扩增有赖细胞因子、小分子化合物等组合，通过研究往无血清培养基添加细胞因子、小分子化合物保持其增殖能力的同时阻止其分化，解决扩增间充质干细胞的难题。目前间充质干细胞的体外扩增主要有向培养基中加入一定量的动物来源成分，如胎牛血清。但是，动物来源成分往往含有一定量的免疫原成分或者病原微生物，这些外源物会引起病人严重的免疫反应，危害病人的健康，影响干细胞移植效果，最终可能造成干细胞移植的失败。

中国专利申请CN112662624 A公布了一种用于骨髓间充质干细胞体外培养和扩增的无血清培养基，其特征在于，为一种水溶液，其组分及其含量如下：基础培养基20-40g/L，生长因子5-15ng/mL，红茶菌发酵液8-22mg/mL，血清蛋白质3-20mg/mL，硒代蛋氨酸1-10ng/mL，阿魏酸钠0.1-0.4mg/mL，二甲双胍3-8ng/mL，3'-脱氧烟酰胺腺嘌呤二核苷酸5-12ng/mL，L-谷氨酰胺150mg/L-550mg/L，复合维生素30-110μM，胰岛素12mU/L-24mU/L。然此发明中所含的二甲双胍会干扰维生素的吸收，造成营养不均。

因此急需研制一种无动物来源成分的可扩增间充质干细胞的无血清培养基，在促进间充质干细胞扩增、阻止其分化，使脂肪、骨髓、胎盘、脐带血造血干细胞在体外扩增的同时依然保持细胞多向分化的能力以外，确保无外源物会引起病人严重的免疫反应，从而影响干细胞移植效果。

发明内容

本发明旨在提供一种无动物来源成分的可扩增间充质干细胞的无血清培养基，促进其扩增、阻止其分化，使脂肪、骨髓、胎盘、脐带血造血干细胞在体外扩增的同时依然保持细胞多向分化的能力。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种扩增间充质干细胞的无血清培养基，包括以下组分及其浓度：