[发明专利]细胞核CNV的检测试剂在制备肿瘤诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了细胞核CNV的检测试剂在制备肿瘤诊断试剂盒中的应用。所述试剂盒通过检测细胞核CNV的异常来判定是否为肿瘤。所述细胞核CNV的检测试剂包括：细胞核DNA提取试剂，细胞核DNA建库测序试剂、细胞核CNV分析系统；还进一步包括细胞膜裂解试剂和细胞核富集装置。细胞核CNV分析系统通过软件对细胞核DNA的测序数据进行分析处理，获得细胞核CNV数据。本发明通过实验发现：细胞核CNV的检测可以用来区分膀胱癌患者与膀胱良性病变患者，并且相对于尿脱落细胞的CNV检测，针对细胞核的CNV检测对于肿瘤诊断具有更高的准确性。

技术领域

本发明属于生物医学诊断技术领域，具体涉及细胞核CNV的检测试剂在制备肿瘤诊断试剂盒中的应用。

背景技术

癌症是20世纪最可怕的疾病之一，并在21世纪继续蔓延，发病率不断上升。恶性肿瘤细胞之间是存在异质性的，并表现出不同的生物学特性，这些特性通常是由遗传不稳定性引起的。这种异质性包括功能(多型性)和结构(多型性)的变化。在结构改变中，肿瘤细胞最常见的是核大小和形状、染色质组织、核仁大小和数量以及核仁周围空间的改变。其中细胞核大小的变化一直被细胞病理学家作为一个重要的参数。因此，基于细胞核大小对正常细胞以及肿瘤细胞进行区分，可有效的实现肿瘤细胞基因组信息的获取。

众所周知，癌症是一种基因组疾病，癌症感兴趣的基因组畸变大多是体细胞畸变，因为肿瘤产生于正常细胞，其基因组获得性畸变。拷贝数变异(CNV)是癌症中最重要的体细胞畸变之一，因为致癌基因的激活往往归因于染色体拷贝数扩增，而抑癌基因的失活往往是由突变相关的杂合缺失或纯合缺失引起的，其中包括特定DNA片段的增殖和缺失。现在大量研究已经发现了CNVs和癌症之间的联系5。因此，体细胞CNV的鉴定对肿瘤预后和改善治疗有重要作用。

发明内容

本发明的目的是，提供细胞核CNV的检测试剂在制备肿瘤诊断试剂盒中的应用。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案如下：

本发明提供了细胞核CNV的检测试剂在制备肿瘤诊断试剂盒中的应用，所述试剂盒通过检测细胞核CNV的异常来判定是否为肿瘤。

作为优选实施方案，所述肿瘤为泌尿系统肿瘤。

作为优选实施方案，所述泌尿系统肿瘤包括前列腺癌、膀胱癌、肾癌、尿路上皮癌、睾丸癌。

作为优选实施方案，所述细胞核CNV的检测试剂包括：细胞核DNA提取试剂，细胞核DNA建库测序试剂、细胞核CNV分析系统。

作为优选实施方案，所述细胞核CNV的检测试剂还包括细胞膜裂解试剂和细胞核富集装置。

所述的细胞膜裂解试剂可以是市售的试剂盒，也可以是包含triton X-100，CHAPS，NP-40，n-dodecyl-β-D-maltoside，Tween-20以及Digitonin的任意一种或一种以上任意组合的细胞膜裂解试剂。

细胞膜裂解后的溶液，高速离心，收集细胞核。可以采用任意形式的细胞核富集装置实现对细胞核的收集。

作为优选实施方案，所述细胞核DNA提取试剂选自碱裂解法提取试剂、酚抽提法提取试剂、硅胶膜离心柱提取试剂、磁珠法提取试剂；另外也可选用市售的DNA提取试剂。

作为优选实施方案，所述细胞核DNA建库测序试剂采用市售的微量建库试剂盒进行DNA建库；可以是Illumina公司的Nextera XT DNA Library Preparation Kit(货号：FC-131-1024)、NEB公司的Ultra^TMII FS DNA Library Prep Kit for Illumina(货号：E6177)，也可以是Kapa公司的KAPA HyperPlus Kit(货号：7962401001)。然后对构建的细胞核DNA文库进行测序，双端150，每个样本数据需求量3G。