[发明专利]一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，包括用于特异性扩增的3种血清型的禽致病性大肠杆菌基因序列的引物对组合，其中，所述的3种血清型的APEC菌株分别为EC164、EC165、EC168，所述用于特异性扩增O2型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；用于特异性扩增O78型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；用于特异性扩增O145型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核苷酸序列。该禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法具有特异性好、快速简便、成本低廉的优势，可以快速检测优势流行血清型，掌握流行病学特征，为疾病防控提供依据。

技术领域

本发明涉及兽医传染病检测技术领域，具体为一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法。

背景技术

禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli，APEC）为革兰氏阴性菌，是肠外致病性大肠杆菌中的一种，在鸡和鸭、鹅等水禽中均有广泛的流行，感染后的病禽通常伴有全身性病变和特征性病变如心包炎、肝周炎、气囊炎等，甚至引起急性败血症而死亡。通常情况下幼禽对该病易感，多因急性败血症死亡，日龄较大的鸡具有一定的抵抗力，而成年产蛋鸡的大肠杆菌性败血性腹膜炎则可引起较高的的死亡率，且APEC还可以穿透蛋壳引起鸡胚感染，造成死胚、孵化率下降和弱雏率增加，给养禽业造成严重的经济损失。

禽致病性大肠杆菌血清型众多，同时，抗生素滥用乱用导致APEC耐药情况日趋严重，不易控制，而且由于防控过程中抗生素的大量使用导致禽产品存在药物残留，严重影响人体健康。

市场上一般通过对病原菌的检测来及时发现禽类的感染，目前对病原细菌的检测，主要依靠常规的细菌学培养方法，耗时长，操作繁琐，费时耗力，而PCR技术因其特异性强、敏感性高、操作简单快速而得到广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，以解决上述背景技术提出的目前市场上对于病原细菌检测中存在的耗时长、操作繁琐、费时耗力等难题。

为此，本发明提供如下技术方案：一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，包括用于特异性扩增的3种血清型的禽致病性大肠杆菌基因序列的引物对组合，其中，所述的3种血清型的APEC菌株分别为EC164、EC165、EC168。

进一步优化本技术方案，所述用于特异性扩增O2型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；

用于特异性扩增O78型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；

用于特异性扩增O145型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核苷酸序列。

进一步优化本技术方案，所述PCR试剂盒包括2×RapidTaqMasterMix（withddH2O）。

进一步优化本技术方案，所述PCR试剂盒包括3种血清型的阳性对照样本。

进一步优化本技术方案，所述3种禽致病性大肠杆菌为EC164灭活菌液（O78阳性对照）、EC165（O2阳性对照）、EC168（O145阳性对照）。

一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒的鉴定方法，该鉴定方法包括以下步骤：

S1：获取待检测菌株的纯培养物，得到菌液；

S2：利用权力要求2、3中所述的PCR试剂盒，对步骤S1中的菌液纯培养物进行多重PCR；

S3：对步骤S2的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据条带大小确定待检测APEC的血清型。