[发明专利]一种免疫测定方法及其应用

说明书

本发明提供了一种免疫测定方法，其包括如下步骤：S1：对含待测靶分子的待测样本进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值；S2：计算第一测值/第二测值的比值；S3：确定待测样本中待测靶分子的浓度。采用本发明的测定方法能够解决HOOK效应样本的问题，所述方法不受检测范围限制，能够直接测得高达10supgt;6/supgt;ng/ml水平的高值样本浓度；重复性良好，检测速度快。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种免疫测定方法及其应用。

背景技术

免疫学检测是基于抗原-抗体特异性反应的原理进行的，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被测物进行显示或信号的放大，常被用于检测蛋白质、激素等微量生物活性物质。

光激化学发光法是化学发光分析技术的常用方法之一，可用于研究生物分子间的相互作用，临床上主要用于疾病的检测。该技术整合了高分子微粒技术、有机合成、蛋白质化学及临床检测等相关领域的研究。光激化学发光分析技术的技术原理为:敏化剂在激光照射下能将周围环境中的氧分子激发为单线态氧分子，单线态氧分子能够与相距200nm左右的发光组合物反应，产生一定波长的光信号；当样品中包含待测抗原或抗体时，该抗原抗体的免疫反应能够使包含敏化剂的供体颗粒与包含发光组合物的受体颗粒结合，从而产生特定波长的光信号，检测该光信号即可检测待测抗原或抗体的含量。

在抗原-抗体的剂量反应曲线中，当抗体量固定时，反应信号会随着抗原量的增加呈现出先上升后下降的现象。将反应信号随抗原剂量增加而上升的区域称为“前带”区域，反应信号随抗原剂量增加而下降的区域称为“后带”区域，前带与后带之间衔接的区域称为“等价带”。

在免疫反应中，随着抗原与抗体的比例上升其反应性呈现出先上升后下降现象，被称为“钩状效应”或“HOOK效应”。在临床上，钩状效应会导致高值样本产生错误的阴性结果，也就是“假阴性”。

目前的免疫检测方法通常是利用剂量-反应曲线的前带区域，通过待测物含量与反应信号的线性关系计算待测物的浓度。而这种检测方法有诸多缺陷，例如：

检测范围狭窄：传统的免疫检测试剂只能利用剂量反应曲线的前带区段进行检测，检测浓度范围狭窄。超出检测范围的样本需要经过稀释后检测，操作复杂、耗时长、对稀释的精度要求高；

HOOK效应：传统的免疫检测试剂因为缺少识别HOOK效应的手段，常需要临床医师结合患者临床表现采用稀释血清样本的方法来鉴别样本是否存在HOOK效应，其操作复杂、耗时长，易造成漏检。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种免疫测定方法。采用本发明的测定方法能够简便、快捷、精确地计算出待测物浓度。

为了实现上述目的及其他相关目的，本发明采用如下的技术方案：

本发明的第一方面提供了一种免疫测定方法，其包括如下步骤：

S1：对含待测靶分子的待测样本进行两个平行的免疫反应检测，记录两个平行的免疫反应的检测结果，分别计为第一测值和第二测值；

S2：计算第一测值/第二测值的比值；

S3：确定待测样本中待测靶分子的浓度。

根据本发明的一些实施方式，所述两个平行的免疫反应检测中，待测靶分子的含量/特异性捕获分子的含量的比值不同；其中所述特异性捕获分子能够与待测靶分子特异性结合。

根据本发明的一些实施方式，所述两个平行的免疫反应检测中，特异性捕获分子的含量/待测靶分子的含量的比值更大的免疫反应的检测结果计为第一测值，另一个为第二测值。

根据本发明的一些实施方式，待测靶分子选自抗原或抗体。