[发明专利]一种可溶性VP2抗原、疫苗、抗原的制备方法

权利要求书

1.一种可溶性VP2抗原，其特征在于，所述VP2抗原通过将VP2基因克隆到pColldⅢ载体上构成表达质粒pColldⅢ-VP2，转化进入BL21(DE3)感受态细胞(pTf16分子伴侣)，得到基因工程菌种Escherichia coli pTf16/BL21/pColldⅢ-VP2，提取得到可溶性VP2抗原；

所述VP2基因的核苷酸序列如核苷酸序列NO.1所示。

2.一种VP2亚单位疫苗，其特征在于，含如权利要求1所述的可溶性VP2抗原。

3.根据权利要求1所述的VP2亚单位疫苗，其特征在于，VP2抗原的浓度为1mg/mL。

4.根据权利要求1所述的VP2亚单位疫苗，其特征在于，为油包水乳液，其含有弗氏佐剂，弗氏佐剂和VP2抗原的浓度比为1:1。

5.一种如权利要求1所述的可溶性VP2抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：制备经密码子优化的VP2基因；

步骤2：将步骤1的VP2基因连接到pColldⅢ载体上，得到表达质粒pColldⅢ-VP2；

步骤3：将表达质粒pColldⅢ-VP2转化进入到BL21(DE3)感受态细胞(pTf16分子伴侣)中，得到基因工程菌种Escherichia coli pTf16/BL21/pColldⅢ-VP2，收集该工程菌种所表达的VP2蛋白即可得到所述的可溶性VP2抗原。

6.根据权利要求5所述的可溶性VP2抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体包括如下子步骤：

子步骤11：提取IBDV病毒RNA；

子步骤12：采用如核苷酸序列NO.2和NO.3所示的VP2全基因引物，针对IBDV病毒RNA进行反转录合成cDNA；

子步骤13：以cDNA为模板，扩增得到未进行密码子优化的VP2基因；

子步骤14：在子步骤13的VP2基因的N端加入NdeⅠ酶切位点、C端加入6×His标签和XhoⅠ酶切位点，即可。

7.根据权利要求5所述的可溶性VP2抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，工程菌种所表达的VP2蛋白进行纯化、超滤即可得到可用于VP2亚单位疫苗的可溶性VP2抗原。