[发明专利]玉米C型不育胞质恢复基因Rf12及其紧密连锁标记的应用

权利要求书

1.一种玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的紧密连锁标记SNP^-55的扩增引物对，其特征在于，包括1对引物对：

F：5’-agtgcctgtgcttgcccattca-3’；

R：5’-tcagatagctacctttgcttgcgc-3’。

2.如权利要求1所述的玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的紧密连锁标记SNP^-55的扩增引物对，其特征在于，利用所述的引物对扩增的目的基因片段的核苷酸序列为：Zm00001d007546基因起始密码子ATG上游76bp至ATG下游380bp共456bp的基因组序列；其中，所述Zm00001d007546基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

3.如权利要求2所述的玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的紧密连锁标记SNP^-55的扩增引物对，其特征在于，扩增体系为：每15μl含有如下组分：擎科生物2×T5 Super PCR Mix 7.5μl，ddH₂O 5.5μl，10ng/μl的上下游引物各0.6μl，DNA模板150ng；所述DNA模板使用CTAB法提取自玉米叶片。

4.如权利要求2所述的玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的紧密连锁标记SNP^-55的扩增引物对，其特征在于，扩增程序为：94℃ 5min；94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 1min，35循环；72℃2min；12℃保存。

5.一种利用权利要求1-4任一项所述的紧密连锁标记SNP^-55的扩增引物对培育玉米不育胞质强恢复系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以具有玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的热带恢复系ZH91为亲本之一，通过回交、杂交、单片段代换、组织培养方法培育玉米强恢复系，在其后代中选择具有利用所述的引物对所扩增的目的基因片段的植株，经过多次重复筛选获得玉米C型不育胞质强恢复系；

所述目的基因片段包括Zm00001d007546基因起始密码子ATG上游76bp至ATG下游380bp共456bp的基因组序列，该序列如SEQ ID NO：3所示，且所述玉米C型不育胞质恢复系中SEQID NO：3所示序列的第22位为a碱基。

6.一种如权利要求1-4任一项中所述的玉米C型不育胞质恢复基因Rf12的应用，其特征在于，应用于玉米C型不育胞质恢复基因的分离鉴定、育性连锁分析、恢复基因的回交转育和/或不育化制种；

所述Rf12存在于热带恢复系ZH91中，与标记SNP^-55紧密连锁，在染色体上的位置为：B73_RefGen_v4 Chr2:234057663-234457207；所述标记SNP^-55为Zm00001d007546基因起始密码子ATG上游55bp至ATG下游379bp的基因组序列，该序列如SEQ ID NO：3所示，且所述玉米C型不育胞质恢复系中SEQ ID NO：3所示序列的第22位为a碱基。

7.一种如权利要求1-4任一项所述的紧密连锁标记SNP^-55的应用，其特征在于，应用于玉米C型不育胞质恢复基因的分离鉴定、育性连锁分析、恢复基因的回交转育和/或不育化制种；

所述标记SNP^-55为Zm00001d007546基因起始密码子ATG上游55bp至ATG下游379bp的基因组序列，该序列如SEQ ID NO：3所示，且所述玉米C型不育胞质恢复系中SEQ ID NO：3所示序列的第22位为a碱基。