[发明专利]一株高核糖核酸酿酒酵母菌株及其应用

说明书

本发明公开了一株高核糖核酸酿酒酵母菌株及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用常压室温等离子诱变技术(ARTP)诱变出发菌株(9.20％)，KS培养基初筛诱变菌株，筛选效率大大提高。在得到的若干高产核糖核酸酵母中复筛得到性状优良的JNB‑G03H8。此菌株RNA含量高，在正常的YPD培养基摇瓶培养后，菌体RNA含量(g/DCW)可达12.89％，通过响应面优化实验在优化培养基条件下菌体RNA含量最高可达15.80％，相较于出发菌株G03 9.20％的含量，提高了70.76％，且为非转基因菌，无毒无害，遗传稳定，应用于食品领域安全可靠。

技术领域

本发明涉及一株高核糖核酸酿酒酵母菌株及其应用，属于生物工程技术领域。

背景技术

RNA是生命的重要组成部分之一，普遍存在于所有生命体中，与生物合成蛋白质有着紧密的联系。核酸及其衍生物(鸟苷酸(IMP)和肌苷酸(GMP))可以开发二代味精、酱油等新型食品调味品；用作水稻、瓜果等农作物的生长促进物质；用作制造治疗冠心病、肿瘤、心肌梗塞等疾病的药物等，其工业化生产就显得意义非凡，如图1所示。随着科学技术的快速发展，科研工作者已经阐明其在生物体内的一些作用机理，它在食品、医药、保健、农业等行业具有十分广泛的应用前景，未来利用酵母RNA时也将更加具有针对性和开阔性。

目前生产RNA应用最多的是酵母菌，其RNA含量高，易于培养，且酿酒酵母是一种公认的安全(GRAS)微生物，是RNA的首选工业来源。目前，RNA的各项功能与应用扩展已经引起重视，RNA的高效分离提取对酵母选育工作效率的提升也有着促进作用，富含核糖核酸的酵母选育研究在酵母生产RNA领域中具有十分重要的意义，也逐渐成为研究的主要方向之一。

中国专利申请CN1498264A公开了一种“富核糖核酸啤酒酵母菌种及其制造方法”，该方法制备的酵母菌体中含有相当于菌体重量的10％以上的核糖核酸，但是不超过12％；中国申请专利CN102559522A公开了“一种高核酸面包酵母及其制备方法”，该方法制备的酵母菌体中含有相当于菌体重量的20％以上的核酸，其中的RNA大于12％；中国专利申请CN106635851A公开了“一种高核酸酿酒酵母菌的选育方法”，该方法通过培养基和发酵优化后，酵母菌RNA含量可达14.6％-15.2％；中国专利申请CN101928674A公开了“选育高核酸酵母、用高核酸酵母制备核糖核酸的方法”，该方法筛选出的酿酒酵母菌株在最佳的培养条件下菌体RNA含量可达12％-14％。因此，获得更高RNA含量的酵母菌菌株，提高优良性状目的菌株的筛选效率，一直是领域内的研究热点。

RNA及其降解产物核苷酸在医药、保健品和食品加工业方面有非常广泛的应用前景，但由于目前RNA产品的质量安全和价格因素限制了它的使用。因此本申请对开辟选育高核糖核酸酵母菌株的新方法，实现更高效率及更好性状的目的菌株的筛选，得到更高的RNA产量降低实现菌株高产核糖核酸的成本，提高酵母RNA产品安全性，具有很重要的意义。

发明内容

针对目前存在的问题，本发明通过诱变等方法筛选到一株能够提升核糖核酸产量的酿酒酵母菌株。

本发明的第一个目的是提供一株高产核糖核酸酵母，巴斯德酵母菌属(Saccharomyces pastorianus)JNB-G03H8，已于2021年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22785，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明的第二个目的是提供含有所述巴斯德酵母菌的微生物菌剂。

本发明的第三个目的是提供一种生产RNA的方法，所述方法是将所述巴斯德酵母菌加入培养基中，发酵生产RNA。

在一种实施方式中，所述培养基包括YPD培养基。

在一种实施方式中，所述培养基以葡萄糖、麦芽糖和/或糖蜜为碳源；所述葡萄糖、麦芽糖和/或糖蜜为培养基质量的2～5％。