[发明专利]基于碳点的分子印迹比率荧光探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.基于碳点的分子印迹比率荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、蓝色碳点BCDs的制备；

B、红色碳点RCDs的制备；

C、利用二氧化硅层包覆红色碳点RCDs制备RCDs@SiO₂；

D、将RCDs@SiO₂、蓝色碳点BCDs、莫能菌素、3-氨丙基三乙氧基硅烷与正硅酸乙酯混合发生聚合反应，并从反应产物中脱除莫能菌素，得到基于碳点的分子印迹比率荧光探针，记为MIPs@BCDs/RCDs@SiO₂；

其中，步骤A利用无水柠檬酸作为碳源，采用一步水热法制备蓝色碳点BCDs，制备方法包括：向反应瓶中加入5～15mL的3-(2-氨基乙基氨基)丙基甲基二甲氧基硅烷，通氮气脱气5～15min并加热至100～300℃；另将0.1～1.0g无水柠檬酸溶解于1～4mL无水乙醇中得到无水柠檬酸溶液；在100～300℃搅拌条件下将无水柠檬酸溶液加入装有所述3-(2-氨基乙基氨基)丙基甲基二甲氧基硅烷的反应瓶中，并持续反应0.5～2min，所得粗产物经离心，取上清液，上清液过滤后用有机溶剂洗涤，最后将0.5～2mL纯化产物分散在5～15mL无水乙醇中，即得蓝色碳点BCDs；

步骤B利用桂花树叶作为碳源，采用乙醇浸提法制备红色碳点RCDs，制备方法包括：用去离子水洗涤新鲜桂花叶，蒸发去离子水至干，研磨得到叶子粉末；称取0.5～2g叶子粉末加入40～80mL无水乙醇中，于室温避光条件下剧烈搅拌20～60h，得到红色碳点的粗产品；所得粗产品离心后取上清液，上清液过滤后得到初步纯化的裸红色碳点；取20～40mL初步纯化的裸红色碳点与5～15mL 25％氨水混合，在室温下避光密封搅拌10～30h，得到表面掺杂氮的红色碳点，4000～6000rpm离心5～15min，离心后取上清液，过滤除去未反应物质，干燥后，即得红色碳点RCDs粉末；

步骤C采用改进的法，用二氧化硅层包覆红色碳点RCDs制备RCDs@SiO₂，制备方法包括：取10～30mg红色碳点RCDs粉末超声分散于5～15mL无水乙醇中，在室温搅拌条件下，将0.5～2mL正硅酸乙酯以连续液滴的方式滴入到红色碳点溶液中，搅拌20～40min后，加入25％氨水100～300μL，室温下搅拌10～30h；所得产物经离心，取上清液，并依次用乙醇和超纯水洗涤以去除未反应物质，干燥后，即得RCDs@SiO₂；

步骤D采用改进的溶胶-凝胶法制备分子印迹比率荧光探针，制备方法包括：取10～30mg RCDs@SiO₂和0.1～1mL蓝色碳点BCDs分散于10～30mL无水乙醇中，加入10～30mg莫能菌素和100～160μL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，室温下避光剧烈搅拌0.5～2h，得到混合液；然后，将正硅酸乙酯200～300μL和25％氨水100～200μL在剧烈搅拌下以连续液滴的方式加入所述混合液中，密封，室温下避光搅拌10～30h，超声后，离心取沉淀，用无水乙醇反复洗涤沉淀，以脱除莫能菌素，收集的成品干燥后，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中所述有机溶剂为石油醚或正戊烷，或者其它极性比石油醚更小的有机溶剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中离心条件为：8000～12000rpm离心30min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B和C中干燥温度为30～50℃；步骤D中干燥温度为40～80℃；步骤D中超声功率为100W，频率为40KHz。

5.按照权利要求1-4任一项所述方法制备得到的基于碳点的分子印迹比率荧光探针。

6.权利要求5所述基于碳点的分子印迹比率荧光探针的以下任一应用：

1)用于雪卡毒素的分离富集；

2)用于雪卡毒素的定性及定量检测；

3)用于制备雪卡毒素检测试剂或试剂盒。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述雪卡毒素为P-CTX-3C。