[发明专利]一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法

权利要求书

1.一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)模拟海水配制：

将海盐加入蒸馏水中，搅拌至混合均匀后曝气2-3天得到模拟海水；

2)荧光微塑料溶液配制：

将荧光微塑料加入步骤1)得到的模拟海水中，超声混合均匀后得到荧光微塑料溶液；

3)贻贝采集驯养：

3.1)现地采集或购买新鲜的贻贝；

3.2)将步骤3.1)采集或购买到的贻贝放入低温室内的玻璃缸中驯养3-7天，玻璃缸中放置有步骤1)得到的模拟海水，驯养2-3天时给贻贝喂食螺旋藻，及时检查贻贝的状态，取出死亡个体；

4)暴露实验设置：

4.1)设置1个对照组和1个实验组，对照组中贻贝的暴露液为步骤1)得到的模拟海水，实验组中贻贝的暴露液为步骤2)得到的荧光微塑料溶液；

4.2)对照组和实验组分别使用40只贻贝，将贻贝养殖于暴露液中暴露7天，每天分别从对照组、实验组的暴露液中取出500mL用于化学分析以及使用荧光显微镜观察荧光微塑料含量，分析荧光微塑料浓度的变化；每天取出死亡个体，记录个数后保存于冰箱；暴露第四天给对照组的实验组贻贝喂食螺旋藻；

4.3)暴露结束后，从对照组和实验组中分别随机取出5只贻贝，将贻贝室温下清洗后放入筛网中，盖上锡箔纸，自然沥干水分，然后测量贻贝的体长、带壳湿重并记录；

5)贻贝组织系统中荧光微塑料的提取分离：

5.1)准备，将解剖工具、消解用的玻璃瓶、培养皿用滤膜过滤过的过滤水冲洗，并做好标记；

5.2)解剖，将贻贝置于台面上，紧贴壳内壁用解剖刀分别割断两侧闭壳肌，掰开壳，用镊子取出软组织或者整个消化系统，解剖时避免误取其它组织，然后解剖性腺、内脏团、鳃、外套膜组织；

5.3)消解，将步骤5.2)解剖得到的组织置于锥形瓶中，加入消解液后超声5分钟，将锥形瓶置于振荡培养箱中消解24小时得到组织液；

5.4)分离过滤，将步骤5.3)得到的组织液抽滤至玻璃纤维滤膜，用过滤水冲洗过滤器，将玻璃纤维滤膜置于洁净干燥的玻璃培养皿中，做好标记后置于烘箱中干燥待测；

6)微塑料观察：

6.1)抽取实验组的暴露液100μL并制片，用荧光显微镜观察并采集图形，每天观察1次荧光微塑料浓度的变化；

6.2)将步骤步骤5.2)解剖得到的组织制片，用荧光显微镜观察其荧光微塑料含量；

6.3)将步骤步骤5.3)得到的组织液制片，用荧光显微镜观察其荧光微塑料含量；

7)生物组织酶活测定：

7.1)总超氧化物歧化酶T-SOD测定；

7.2)丙二醇MDA测定；

7.3)过氧化氢酶CAT测定。

2.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤1)中，模拟海水的盐度为26‰。

3.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤2)中，荧光微塑料的粒度为90-110μm，荧光微塑料与模拟海水的比例为3mg:(1-3)L。

4.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤3.2)中，低温室的温度为14℃。

5.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤4.2)中，暴露的温度为14℃，光照条件为12小时光照和12小时黑暗，冰箱的温度为-80℃。

6.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤4.3)中，清洗的操作为将贻贝的贝壳闭合，顺着贝壳表面放射肋的方向用牙刷刷洗。

7.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤5.1)中，滤膜的孔径为1μm。

8.根据权利要求1所述的一种利用荧光微塑料处理贻贝的方法，其特征在于：所述步骤5.3)中，消解液为浓度为100g/L的氢氧化钾溶液，振荡培养箱的温度为60℃，转速为90r/min。