[发明专利]一种鉴别火把花根与其混伪品的引物及方法

说明书

本发明公开了一种鉴别火把花根与其混伪品的引物及方法，包括有引物对ITS2F和ITS3R，其中正向引物ITS2F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，反向引物ITS3R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；通过分别提取火把花根与其混伪品的基因组DNA；分别以提取的取火把花根与其混伪品的基因组DNA为扩增模板，以引物对ITS2F和ITS3R作为引物，进行PCR扩增，分别得到取火把花根与其混伪品的扩增产物；将所得的各测序峰图利用CodonCode Aligner V 6.0.2软件并基于隐马尔夫模型的HMMer注释方法获得火把花根与其混伪品的内部转录间隔区ITS2序列从而分别绘测出火把花根与其混伪品的ITS2二级结构，通过对比火把花根与其混伪品的ITS2二级结构快速准确地鉴别出火把花根与其混伪品。

技术领域

本发明属于药用植物和中药鉴定领域，具体涉及一种鉴别火把花根与其混伪品的引物及方法。

背景技术

火把花根为卫矛科雷公藤属植物昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum(Levl.)Hutch去皮的根心。火把花根祛风除湿，舒筋活络，清热解毒。具有抗炎和免疫抑制作用，用于类风湿性关节炎、红斑狼疮、原发性肾病综合症、糖尿病肾病等领域，并取得了相当不错的临床疗效。

火把花根药材目前主要分布于长江流域至西南地区，分布的经度范围较广，东经99°～122°，北纬21°～31°的区域，其药材目前基本上来自于野生，其野生蕴藏量在1.5万吨左右，但火把花根药材生长成为达到药用标准中药材的时间超过10年甚至更长。据初步估算和野外调查，目前火把花根药材市场年需求量一般为1000吨左右，加之由于人口和经济压力增加，产地普遍开荒垦坡，以及经济林建设和林分改造等，火把花根原生生境遭到极大破坏，野生种群恢复破碎化和边缘化非常严重，资源逐渐枯竭。火把花根与雷公藤等都属于卫矛科植物雷公藤属，两者的化学成分以及药理作用都非常相似，并且火把花根的毒性远远小于雷公藤等药材，市场上有些供应商常常将火把花根药材和雷公藤等其他药材互相充当使用，并且药用部位都是根部，由于外形极为相似、鉴定者知识局限等多方面因素，导致火把花根与雷公藤、东北雷公藤、南蛇藤等药材难以区别，严重影响了市场混乱以及用药准确与安全。为保证用药安全，需要一种更能精准、可靠、快速的方法用于鉴别火把花根与其混伪品。

自2010年来，由陈士林院士等首次提出利用DNA条形码来鉴别药用植物，并且该技术在药用植物鉴定方向得到了极大的应用和发展，DNA条形码技术具有简单高效，不受样品的外观形态以及研究者的专业限制，可较好、较快地适用于中药材或植物的真伪鉴别。目前，关于火把花根的研究大多在其临床、化学成分、药理药效的研究上，对其药材的鉴别还是运用传统的性状等方法进行鉴别，由于市场上根类药材都基本一样，鉴定难度较大。随着分子生物学的发展，越来越多的分子生物鉴别方法运用到中药材的鉴别上，因此，本发明利用分子鉴别技术对火把花根药材与其混伪品(雷公藤、东北雷公藤、南蛇藤、金樱根、苦皮藤)进行鉴定，为火把花根药材的鉴别提供了有效手段，更为后期药品的质量提供了有效保障。

发明内容

针对上述的不足，本发明的第一目的是提供一种鉴别火把花根与其混伪品的引物；

本发明的第二目的是提供一种利用引物鉴别火把花根与其混伪品的方法；

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种鉴别火把花根与其混伪品的引物，包括有引物对ITS2F和ITS3R，其中正向引物ITS2F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，反向引物ITS3R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

进一步地，具体步骤如下：

1)分别提取火把花根与其混伪品的基因组DNA；

2)分别以步骤1)中提取的取火把花根与其混伪品的基因组DNA为扩增模板，以引物对ITS2F和ITS3R作为引物，进行PCR扩增，分别得到取火把花根与其混伪品的扩增产物；