[发明专利]一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途；通过免洗脱细胞制剂复苏法制得细胞悬液，并结合质量分数10％的葡萄糖对细胞悬液进行稀释，制得高性能的细胞溶液，制备的细胞溶液中的细胞活力、凋亡水平等均得到了极大程度的改善，进而可将细胞溶液运用于治疗关节炎药剂中，提高关节软骨修复程度以及关节炎的疗效，还可以用于全身静脉输注，兼顾细胞制剂全身应用的适应症，为提高临床级间充质干细胞产品的疗效提供了解决方法。

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，特别是一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途。

背景技术

间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能，在组织工程、细胞替代治疗、再生医学、基因治疗等领域得到了日益广泛的应用。现有技术中，间充质干细胞的长期保存主要为冻存的方式，而临床使用的MSC均需要在复苏后注射或输注入人体，故需要使用临床级别的溶质对细胞悬液进行稀释。

现有技术中，间充质干细胞的复苏方法主要包括两个，(1)常规复苏法：37℃孵温完全培养基，从液氮罐中取出细胞冻存管，放入40℃水浴锅中，轻轻晃动管身，注意管帽始终高于液面；待冻存液融化，酒精消毒后转入超净台，打开盖子，轻轻吹打冻存管内细胞，转移入15mL离心管，按冻存液10倍体积加入完全培养基，300g离心5min，吸弃上清，加入新鲜培养基，临床使用则加入生理盐水等临床常用溶质；(2)免洗脱冻存液复苏法：从液氮罐中取出细胞冻存管，放入40℃水浴锅中，轻轻晃动管身，注意管帽始终高于液面；待冻存液融化，酒精消毒后转入超净台，打开盖子，轻轻吹打冻存管内细胞，转移入新鲜培养基，临床使用则加入生理盐水等临床常用溶质。

目前静脉输注常用的细胞复苏的稀释溶质为复方电解质液，用该溶质稀释后的复苏细胞的活力及增殖能力都下降，注射入关节腔后细胞功效会受到影响，因此一般不用于关节腔的注射；而现有技术中，关节腔注射常用的细胞复苏的稀释溶质为玻璃酸钠，因玻璃酸钠使用局限，其仅能用于局部注射，不利于按照药品管理制度下的适应症扩展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途；通过免洗脱细胞制剂复苏法，并采用质量分数为10％葡萄糖作为细胞复苏的稀释溶质，其制备的复苏细胞的活性、增殖活性以及凋亡水平均得到了极大程度的改善，能够直接注射入关节腔，提高关节软骨修复程度以及关节炎的疗效，还可以用于全身静脉输注，兼顾细胞制剂全身应用的适应症，为提高临床级间充质干细胞产品的疗效提供了解决方法。

本发明的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：

一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液，由细胞悬液和10％的葡萄糖溶液等体积混合而成，所述细胞悬液由冻存的脂肪间充质干细胞复苏制得，所述冻存的脂肪间充质干细胞的额细胞密度为0.8×10⁷/mL～1.2×10⁷/mL。

优选的，所述的冻存的脂肪间充质干细胞的细胞密度为1.0×10⁷/mL。

本发明提供的第二个目的为：提供一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液的制备方法，包括如下步骤：

S1从液氮罐中取出冻存有脂肪间充质干细胞的细胞冻存管；

S2将所述细胞冻存管水浴融化；

S3对所述细胞冻存管进行消毒；

S4打开细胞冻存管的盖子，轻轻吹打细胞冻存管内的细胞，制得细胞悬液；

其特征在于：所述步骤S1中，冻存的脂肪间充质干细胞的细胞密度为0.8×10⁷/mL～1.2×10⁷ /mL；所述步骤S2中的水浴融化过程中，水浴锅设定温度为42℃，且水浴锅锅盖保持打开状态，轻轻顺时针晃动管身；所述步骤S4后，将细胞悬液与质量分数为10％的葡萄糖溶液等体积混合，制得细胞溶液。