[发明专利]有机微孔滤网滤纸条的制备及其在快速检测柑橘黄龙病中的应用

权利要求书

1.一种有机微孔滤网滤纸条，其特征在于包括有机微孔滤网，有机微孔滤网一端为手持端、另一端为暴露端；所述手持端具有三明治结构，包括中间的有机微孔滤网以及附着在有机微孔滤网两面的滤纸；所述暴露端仅为有机微孔滤网。

2.权利要求1所述有机微孔滤网滤纸条的制备方法，其特征在于：将有机微孔滤网的两面与滤纸粘贴形成三明治结构，再裁剪成条状，一端暴露有机微孔滤网，另一端为三明治结构的滤纸，两面滤纸中间夹有有机微孔滤网。

3.权利要求1所述有机微孔滤网滤纸条在捕获样品DNA中的应用。

4.权利要求1所述有机微孔滤网滤纸条捕获样品DNA的方法，其特征在于：利用有机微孔滤网滤纸条，于研磨和裂解获得的植物组织液中吸附样品DNA，通过洗涤液去除杂质，再将吸附的样品DNA洗脱到去离子水中，完成样品DNA捕获；所述植物组织液由植物组织置于特定缓冲液中研磨和裂解而得；所述特定缓冲液包含20mM Tris-HClpH8.0、25mM NaCl、2.5mM EDTA、0.05％SDS、2％DTT、3％PVP。

5.权利要求1所述有机微孔滤网滤纸条在快速检测柑橘黄龙病中的应用。

6.一种快速检测柑橘黄龙病的LAMP方法，其特征在于：利用权利要求1所述的有机微孔滤网滤纸条捕获样品DNA用于柑橘黄龙病的LAMP检测中。

7.根据权利要求6所述的快速检测柑橘黄龙病的LAMP方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)有机微孔滤网滤纸条法捕获核酸

撕取0.2g左右待测组织样品置于预装有裂解液的研磨袋中，用光滑硬物将待测组织样品研磨破碎，然后用巴氏吸管吸取研磨得到的汁液于2mL离心管中，将有机微孔滤网滤纸条放入汁液中蘸3次，再置于预装有1mL洗涤液的2mL离心管中清洗3次，随后于含25μL LAMP反应液的0.5mL离心管中蘸洗3次进行洗脱；

(2)LAMP反应

LAMP反应程序为：65℃，30min；85℃，7min。

8.根据权利要求7所述的快速检测柑橘黄龙病的LAMP方法，其特征在于：所述裂解液为特定缓冲液，包含20mM Tris-HCl pH8.0、25mM NaCl、2.5mM EDTA、0.05％SDS、2％DTT、3％PVP；所述洗涤液为75％乙醇。

9.根据权利要求7所述的快速检测柑橘黄龙病的LAMP方法，其特征在于：所述LAMP反应液：10×ThermoPol Buffer 2.5μL、dNTP 10mM 3.0μL，MgSO₄ 100mM 1.5μL、Tween-200.5％0.5μL、FIP/BIP 10mM 4.0μL、F3/B3 10mM 4.0μL、Bst DNA聚合酶0.75μL、ddH₂O 8.75μL，共25.0μL。

10.根据权利要求7所述的快速检测柑橘黄龙病的LAMP方法，其特征在于：所述引物F3、FIP、BIP、B3分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。