[发明专利]基于LAMP快速检测有毒蘑菇日本红菇的引物组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种基于LAMP快速检测有毒蘑菇日本红菇的方法，其特征在于，包括如下步骤：提取待测样品的基因组DNA，以提取的基因组DNA为DNA模板，进行LAMP反应；

所述LAMP反应的体系为10μL，包括：1μL pH＝8.8的10×ThermoPol buffer、0.4μL浓度为100mM的MgSO4、1.4μL浓度为10mM each的dNTP Mix、0.4μL浓度为8000U/mL的Bst DNAPolymerase、0.6μL浓度为8000U/mL的HNB、1μL浓度为1-10ng/μL的DNA模板、LAMP引物，双蒸水定容；

其中LAMP引物包括：0.12μL浓度为10μM的正向内引物FIP、0.12μL浓度为10μM的10μM反向内引物BIP、1.28μL浓度为10μM的10μM正向外引物F3、1.28μL浓度为10μM的反向外引物B3和0.64μL浓度为10μM的环引物LB；碱基序列如下：

FIP：5’-AGCTGGCTTTGAGAGGAAAGCTAATGGTTTCTTGATCAAGAAGGC-3’；

BIP：5’-TAGTAGGGTCTACTTTGCTGATCCTATAGGTTTGCAAAAGCCCAAG-3’；

F3：5’-TGTCGTGATATCTTCAACCTT-3’；

B3：5’-AGTCTCTGACGAGACAGTT-3’；

LB：5’-AGCAAAAGCCTCCAAATTCCAA-3’；

所述LAMP反应的程序为：将反应试剂添加完成后加入石蜡油进行封层，离心混匀后60-65℃水浴或金属浴30min～60min，然后在80℃以上孵育至少10min；

终止LAMP反应后，根据反应液颜色变化判断检测结果，若反应液呈蓝色，则表示检测结果为阳性；若反应液呈紫色，则表示检测结果为阴性；

终止LAMP反应后，根据凝胶电泳平行实验是否检出阶梯型条带判断检测结果，若检测到阶梯型条带，则表示检测结果为阳性；若未检测到阶梯型条带，则表示检测结果为阴性。