[发明专利]稳定过表达MIF的Lewis细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种稳定过表达MIF的Lewis细胞株及其应用。本发明稳定过表达MIF的Lewis细胞株的保藏编号为：CCTCCNO：C202195。本发明提供了一种用嘌呤霉素筛选所述稳定过表达MIF的Lewis细胞株的方法。本发明提供了一种荷MIF+/+Lewis肺癌小鼠模型的构建方法。本发明将所述的稳定过表达MIF的Lewis细胞株或所述的荷MIF+/+Lewis肺癌小鼠模型的构建方法在肺腺癌动物实验或临床试验中应用。本发明首次筛选出稳定过表达MIF的Lewis细胞株和动物模型，可用于探索肺腺癌的发生机制，寻找肺腺癌新的治疗靶点，为患者靶向治疗开辟新道路。

技术领域

本发明涉及医学分子生物学技术领域，具体涉及一种稳定过表达MIF的Lewis细胞株及其应用。

背景技术

肺腺癌是最常见的恶性肿瘤之一，在诊断时多数患者已处于中晚期，五年生存率非常低。临床上肺腺癌治疗多以手术、化疗和放疗为主，近年来虽已取得显著进展，但是，目前仍然存在生存率低和副作用强等缺陷。

巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是一种多功能性细胞因子，主要来源于单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、T细胞、B细胞和树突细胞等多种免疫细胞以及血管被批细胞，其作用主要表现为对巨噬细胞迁移的抑制和增强局部炎性反应。此外，MIF参与机体的多项生理和病理功能调节，不仅能诱导肿瘤细胞的分化，更是参与机体的免疫调节，成为一种炎症与肿瘤的关键连接蛋白，在多种肿瘤中表达，影响着肿瘤细胞的增值、凋亡和侵袭。研究表明，MIF在胃癌、宫颈癌、肝癌等组织中高表达，并参与构成肿瘤微环境，促进巨噬细胞的转化；参与肿瘤血管的生成，促进肿瘤细胞的侵润和转移。近来，研究显示MIF是肺癌的发生发展的异常因子之一，MIF有望成为肺癌的治疗靶点，然而，目前相关研究实验中，多采用MIF激活剂或抑制剂，特异性差，与其他细胞靶点有交叉作用反应，影响实验结果准确性。

因此，为了深入探索肺腺癌的发生机制，寻找肺腺癌新的潜在治疗靶点，为患者临床治疗奠定坚实的基础，对肺腺癌细胞进行基因改造是十分必要的。

发明内容

鉴于MIF过表达可以介导肺腺癌中肿瘤的发生发展，本发明要解决的技术问题是提供一种稳定过表达MIF的Lewis细胞株及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

筛选一种稳定过表达MIF的Lewis细胞株，其保藏编号为：CCTCC NO：C202195。

优选的，其基因组中含MIF基因表达载体。

进一步的，所述表达载体为pHS-AVC-LY018。

另提供一种用嘌呤霉素筛选所述稳定过表达MIF的Lewis细胞株的方法，所述嘌呤霉素的浓度为0.2-0.3μg/ml。

优选的，所述嘌呤霉素的浓度为0.25μg/ml。

另提供一种荷MIF+/+Lewis肺癌小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：

(1)选取4-5周龄，雄性C57BL/6小鼠；

(2)取所述稳定过表达MIF的Lewis细胞株制备细胞悬液；

(3)在所述C57BL/6小鼠皮下注射细胞悬液；

(4)接瘤成功后，常规饲养于SPF级饲养室，即成。

优选的，在所述步骤(2)中，所述细胞悬液的细胞终浓度为1.5-2.5×10⁶个/ml。

优选的，在所述步骤(3)中，所述皮下注射的位置为右侧胸部靠近腋中线处。所述皮下注射的注射量为150-250ul/只。