[发明专利]人工重组的H7N9流感病毒及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202111217661.6 | 申请日： | 2021-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN113913396B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 陈化兰;曾显营;田国彬;施建忠;邓国华;李呈军 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/44;C12N15/85;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 邓永红 |
| 地址： | 150001 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人工 重组 h7n9 流感病毒 及其 制备 方法 应用 | ||
1.人工重组的H7N9流感病毒毒株H7-Re4，保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在中国武汉的武汉大学，其保藏号为CCTCC NO：V202161，保藏时间为2021年8月3日。
2.权利要求1所述的毒株H7-Re4在制备预防H7N9流感病毒所导致疾病的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述H7N9流感病毒为A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)毒株。
4.一种疫苗，含有权利要求1所述的毒株H7-Re4。
5.权利要求1所述的毒株H7-Re4的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设计HA基因特异性扩增和突变引物，利用RT-PCR方法，扩增出高致病性性H7N9亚型禽流感病毒A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)株HA基因的HA1和HA2片段，在扩增HA1片段的同时将HA基因裂解位点氨基酸由-PKRKRIAR-突变为-PKGR-，使其由高致病性禽流感病毒分子特征突变为典型低致病性禽流感病毒分子特征；再利用重叠延伸反应，扩增出裂解位点为典型低致病性禽流感病毒分子特征的HA片段，插入pBD质粒，构建重组HA基因双向转录载体；
(2)RT-PCR扩增H7N9亚型流感病毒A/chicken/Yunnan/SD024/2021(H7N9)的NA基因全长，插入pBD质粒，构建重组NA基因双向转录载体；
(3)将(1)、(2)所述构建的HA、NA基因2个重组pBD双向转录载体质粒和含有流感病毒鸡胚高滴度适应株A/PR/8/34(H1N1)的PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因的6个pBD双向转录载体质粒混合，并与转染试剂一起接种293T细胞，将培养后细胞及上清接种鸡胚，获得具有HA活性的H7N9禽流感重组病毒株H7-Re4。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，扩增HA1基因的引物对如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示，其中SEQ ID No.10为HA裂解位点的突变引物；扩增HA2基因的引物对如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示。
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