[发明专利]牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失株的应用

说明书

本发明提供牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失株的应用，基于牛源A型多杀性巴氏杆菌的基因缺失株，免疫接种促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉保护；所述交叉保护是对牛源A型、B型、F型以及猪源、禽源、兔源A型多杀性巴氏杆菌感染的交叉保护。所述基因缺失株为hyaD 基因的缺失；或为qseC基因的缺失。所述基因缺失株是通过同源重组方法，构建的牛源多杀性巴氏杆菌CQ2株（PmCQ2）hyaD基因缺失株、PmCQ2ΔhyaD或qseC基因缺失株PmCQ2ΔqseC。所述hyaD基因及qseC基因缺失均能显著降低野生株毒力，对不同血清型、不同宿主源多杀性巴氏杆菌均具有较强的交叉保护作用。为多杀性巴氏杆菌通用型疫苗的研发提供了候选靶标。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及牛源A型多杀性巴氏杆菌hyaD及qseC基因缺失株及应用，以及所述基因缺失株的构建。

背景技术

多杀性巴氏杆菌是一种革兰氏阴性、两级浓染短杆菌，可感染多种畜禽及野生动物，也可感染人，每年给畜牧业带来了巨大的经济损失。根据其荚膜多糖的不同可分为A、B、D、E、F五种荚膜血清型，根据其LPS差异又可分为16种血清型，不同动物主要感染的血清型不同，其导致的疾病类型也存在显著差异。多杀性巴氏杆菌可作为共生菌在动物鼻咽部、呼吸道等部定植，但在运输应激、机体抵抗力下降等条件下，多杀性巴氏杆菌大量繁殖，并扩散到肺肝脾等脏器，引发如牛出血性败血症、猪肺疫、禽霍乱和兔巴氏杆菌病等疫病。

目前，多杀性巴氏杆菌的防控主要采用疫苗预防和抗生素治疗相结合。但当前针对多杀性巴氏杆菌的商品化疫苗仅少数几种，并且各自仅对单一动物源的某血清型多杀性巴氏杆菌具有较好的免疫保护作用，其交叉免疫保护性弱或无。从多杀性巴氏杆菌的血清型和可感染动物来看，目前所具有的多杀性巴氏杆菌疫苗远不能达到有效防控多杀性巴氏杆菌感染的目的。而在抗生素治疗过程中，由于抗生素的长久大量使用，也导致了多杀性巴氏杆菌越来越多的耐药菌株出现，这也为多杀性巴氏杆菌感染的有效治疗带来了困难。因此，开发广谱型多杀性巴氏杆菌疫苗及不易产生耐药性的药物是有效防控多杀性巴氏杆菌感染的关键。目前，虽有不同类型多杀性巴氏杆菌疫苗的研究，如灭活苗、弱毒苗、亚单位疫苗、基因重组疫苗、DNA疫苗等，但其交叉免疫保护效果并不理想，有较好作用的通用型交叉保护性疫苗仍然欠缺。开发相关通用型疫苗在预防多杀性巴氏杆菌病，提高动物福祉、阻断人兽共患病传播方面具有重要意义。

虽然前面Homchampa等人的研究发现，aroA基因缺失能增强荚膜A型多杀性巴氏杆菌的交叉免疫保护性，但也仅发现aroA基因缺失株对荚膜A型的其他LPS血清型菌株具有一定的交叉保护作用，其交叉保护范围较窄；同时，该基因在不同菌株中缺失后，赋予菌株的交叉免疫保护性具有显著差异。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失株的应用。

进一步，还提供牛源A型多杀性巴氏杆菌hyaD基因缺失株、qseC基因缺失株及其构建方法。

实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

牛源A型多杀性巴氏杆菌基因缺失株的应用，基于牛源A型多杀性巴氏杆菌的基因缺失株，免疫接种促进动物对不同血清型、不同动物源多杀性巴氏杆菌感染的交叉保护。所述交叉保护是对牛源A型、B型、F型以及猪源、禽源、兔源A型多杀性巴氏杆菌感染的交叉保护。

进一步，所述基因缺失株为hyaD基因的缺失；或者所述基因缺失株为qseC基因的缺失。所述基因缺失株为PmCQ2ΔhyaD或基因缺失株为PmCQ2ΔqseC，均保藏于中国典型培养物保藏中心。

所述基因缺失株为PmCQ2ΔhyaD通过同源重组方法构建，包括如下步骤：