[发明专利]一种NK细胞无血清培养基及其用途

说明书

本发明公开了一种NK细胞无血清培养基及其用途，所述NK细胞无血清培养基由基础培养基和添加组分混合配制而成，所述添加组分由rhIL‑2，rhIL‑15，rhIL‑21，他克莫司，甲羟戊酸，异戊二烯焦磷酸盐，重组人胰岛素，重组人脱铁转铁蛋白，重组人血清白蛋白，丙酮酸钠，亚油酸，胆固醇，亚叶酸组成，所述基础培养基是IMDM。本发明的培养基不仅化学成分明确，无血清，无人源和动物源成分，配方简单，性能优异，同时在无血清培养基中加入FK506，在保证细胞高活率同时，可以显著提高NK细胞的扩增速度，NK细胞培养至17天可扩增700倍以上，收获时细胞活率可达95%以上。

技术领域

本发明涉及培养基技术领域，具体为一种NK细胞无血清培养基及其用途。

背景技术

自然杀伤细胞，即NK细胞（Natural Killer Cell），是与T细胞、B细胞齐名却又不同于两者的一类淋巴细胞，同时对人体内的T淋巴细胞及B淋巴细胞具有一定的调节作用。NK细胞是与特异性免疫应答无关的一类免疫细胞，它所介导的细胞裂解不受主要组织相溶性复合体（MHC）的影响，故也称其为机体天然免疫系统的“心脏”。

作为机体的第一道防线，NK细胞不仅能够清除细胞内寄生菌、病毒及老化变异细胞，对癌细胞也具有极强的清除作用，并且在不发生预先致敏的条件下可实现迅速活化，具备强大的抗感染、抗肿瘤作用。因此，目前在临床上利用NK细胞过继性免疫治疗成为了肿瘤细胞免疫治疗的重要手段。

由于常用NK细胞培养液添加有一定比例的异种动物来源的血清，而血清成分复杂，存在批间差异，这些都容易影响NK细胞培养的稳定性，加上血清中存在的异源物质，容易引起异种动物病原体感染或异种动物源成分的残留，在临床使用上存在一定风险。因此，在临床上，使用无血清培养基是对NK细胞进行扩增的基础。但现有的无血清培养基，多数会添加人AB血清或人血清白蛋白等成分，增加了成分的复杂程度，虽然避免了引入异种动物源成分，但受原料来源的影响，可能会有感染艾滋病、乙肝等传染疾病的风险，极大地提高了对于产品质控的要求。且目前的无血清NK细胞培养基则普遍存在效能差，细胞扩增倍数差且生物活性低等问题，故采用安全可靠、化学成分明确的无血清NK细胞培养基，对其后续在临床上的应用极为关键。

专利文献CN104928241B，公开日2018.04.13，公开了一种体外活化扩增NK细胞的培养液，所述NK细胞培养液重组人胰岛素、重组人转铁蛋白、谷氨酰胺、重组人白蛋白、维生素PP、氢化可的松、微量元素。上述专利文献公开的NK细胞培养液在开发的整个培养基体系中没有引入非人源性蛋白，因而避免了培养基混入人源成分或其他动物来源成分。但培养细胞时需要添加离体人血浆，且扩增效率稍显不足，细胞质量有待提高。因此有必要提供扩增效率高，培养的细胞质量更优良的无血清、无人源、无动物源成分的NK细胞培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种NK细胞无血清培养基及其用途，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种NK细胞无血清培养基，所述培养基包括基础培养基和添加组分，所述添加组分包括rhIL-2、rhIL-15、rhIL-21、FK506、甲羟戊酸、GGPP、重组人胰岛素、重组人脱铁转铁蛋白、重组人血清白蛋白、丙酮酸钠、亚油酸、胆固醇、亚叶酸。

较优化的方案，以所述添加组分的体积计，所述添加组分各成分的含量如下：rhIL-2 0.1～20 ng/mL、rhIL-15 10～100 ng/mL、rhIL-21 0.1～20 ng/mL、FK506 10-100ng/mL、甲羟戊酸0.5～5 µg/mL、GGPP 2～10 µg/mL，重组人胰岛素 0.01～15 µg/mL、重组脱铁转铁蛋白 0.1～10 µg/mL、重组人血清白蛋白 0.1～5 mg/mL、丙酮酸钠 1～100 µg/mL、亚油酸 0.05～10 µg/mL、胆固醇 0.1～10 µg/mL、亚叶酸 0.05～10 µg/mL。