[发明专利]一种冻干保护剂、荧光PCR检测试剂盒及冻干工艺

说明书

本发明提供一种冻干保护剂、荧光PCR检测试剂盒及其冻干工艺，其中，冻干保护剂用于荧光PCR试剂的冻干，冻干保护剂包括以下组分：海藻糖、羟乙基淀粉和吐温20。本发明的冻干保护剂通过采用海藻糖、羟乙基淀粉和吐温20，在冻干过程中既维持了蛋白质的活性构象、具有适合的玻璃化温度，又在冻结和脱水过程对蛋白质起到很好的保护作用，并且不会对PCR反应产生抑制作用。该冻干保护剂可以应用于不同厂商的荧光PCR试剂的冻干，产品的通用性强，对荧光PCR试剂性能无抑制作用。

技术领域

本发明涉及冻干技术领域，特别涉及一种冻干保护剂、荧光PCR检测试剂盒及其冻干工艺。

背景技术

荧光PCR试剂在冷冻干燥过程中，必须添加冻干保护剂来保护蛋白的固有结构，防止蛋白类活性物质在冻结和干燥过程中产生损伤。但是，由于各厂商生产的荧光PCR试剂在来源、组分、比例和制备工艺上存在差异，导致不同厂家商生产的荧光PCR试剂均需筛选适合的冻干保护剂成分，优化反应体系，整个研究过程周期长，工作量大，成本较高。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种冻干保护剂、荧光PCR检测试剂盒及其冻干工艺，旨在提供一种通用的冻干保护剂。

为实现上述目的，本发明提出的冻干保护剂，所述冻干保护剂用于荧光PCR试剂的冻干，包括以下组分：海藻糖、羟乙基淀粉和吐温20。

在一实施例中，所述冻干保护剂还包括无菌纯化水。

本发明还提出一种荧光PCR检测试剂盒，所述荧光PCR检测试剂盒包括上述冻干保护剂，所述冻干保护剂用于荧光PCR试剂的冻干，包括以下组分：海藻糖、羟乙基淀粉和吐温20。

在一实施例中，所述荧光PCR检测试剂盒包括混合液，所述混合液包括荧光PCR试剂和所述冻干保护剂，所述混合液中，所述海藻糖的终浓度为1-12％(W/V)，所述羟乙基淀粉的终浓度为1-10％(W/V)，所述吐温20的终浓度为0.01-1.00％。

在一实施例中，所述混合液中，所述海藻糖的终浓度为1.5-9.0％(W/V)，所述羟乙基淀粉的终浓度为1.2-9.0％(W/V)，所述吐温20的终浓度为0.03-0.80％。

本发明还提出一种冻干工艺，采用上述冻干保护剂对荧光PCR试剂冻干，其特征在于，包括以下步骤：

将冻干保护剂与荧光PCR试剂混合均匀，得到混合液；

将所述混合液分装入承载物中，并按照预设冻干程序进行冷冻干燥，得到冻干成品。

在一实施例中，所述预设冻干程序为：

预冻阶段：隔板温度为-45℃－-55℃，冷阱温度为-65℃－-75℃，保持2.5-4小时；

升华干燥阶段：隔板温度为-40℃－-30℃，冷阱温度为-65℃－-75℃，开启真空，真空度≤10Pa，保持6-8小时后，温度开始升至-18℃－-12℃，保持时间为1-2小时；

再升华干燥阶段：继续保持真空度≤10Pa，冷阱温度为-65℃－-75℃，板层温度升至0-10℃，保持时间1-2小时后，板层温度升至15-25℃，保持时间3-6小时。

在一实施例中，所述承载物包括PCR管、西林瓶或微流控芯片。

本发明技术方案采用海藻糖对荧光PCR试剂中蛋白质进行有效保护，海藻糖与羟乙基淀粉结合使用可相互弥补不足，避免了玻璃化温度过低或过高，同时可以保持蛋白质的天然构型，提高了蛋白质的冻干活性及储存稳定性。另外，吐温20降低了冻干过程中冰水界面张力所引起的蛋白质冻结和脱水变性，并且在复溶过程中作为润滑剂对蛋白质进行保护。