[发明专利]一种粪便基因组提取试剂盒及使用方法

说明书

本申请提供的粪便基因组提取试剂盒，包括裂解液、第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液，其中，所述裂解液包括盐酸胍、尿素、乙酸铵及曲拉通X‑100，上述粪便基因组提取试剂盒在使用过程中无需对粪便样本进行预处理，减少提取时间，提取过程中未使用有毒试剂，操作安全，可高效提取基因组DNA，提取产物可用于下游进一步实验。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种粪便基因组提取试剂盒及其使用方法。

背景技术

结直肠癌属于全球最常见的恶性肿瘤疾病，在我国其发病率和死亡率均位列第5位且呈持续增高趋势。由于早期症状不明显，临床上多数患者就诊时已处于中、晚期，未能及时接受积极治疗而降低生存率。因此对结直肠癌进行早期的初筛普查尤为重要。

结直肠癌的发生过程是良性肿瘤不断向恶性肿瘤进展演变，是遗传学变化和表观遗传学改变不断积累的结果。表观遗传学包括DNA甲基化、基因组印记、RNA编辑等。其中DNA甲基化是表观遗传学最重要的修饰方式，且已被证实在结直肠癌的发生、进展及侵袭转移中发挥一定的作用。检测基因异常甲基化，对结直肠癌的筛查诊断、判断复发转移和选择治疗方案等方面都具有重要意义。

DNA甲基化检测的前提是获取人基因组信息。目前可通过血液和粪便两种途径获得人的基因，但癌细胞直接脱落进入粪便比直接进入血液早，所以从粪便样本中提取脱落细胞的DNA能更早地进行甲基化检测，从而更早的进行结直肠癌的筛查。

但目前的粪便基因组提取试剂盒存在提取效率不高、产量低、操作不安全卫生等缺陷。

发明内容

鉴于此，有必要针对现有技术存在的缺陷提供一种快速、可靠、安全的粪便基因组提取试剂盒及其使用方法。

为解决上述问题，本发明采用下述技术方案：

本申请提供了一种粪便基因组提取试剂盒，包括：裂解液、第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液；其中，所述裂解液包括盐酸胍、尿素、乙酸铵及曲拉通X-100，所述裂解液中盐酸胍的浓度为4～5mol/L，尿素的浓度为50～100mmol/L，乙酸铵的浓度为30～50mmol/L、曲拉通X-100的浓度为1％～10％(v/v)。

在其中一些实施例中，所述第一洗涤液包括以下原料：盐酸胍、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、盐酸和异丙醇。

在其中一些实施例中，所述第一洗涤液中盐酸胍的浓度为3～6mol/L、三羟甲基氨基甲烷的浓度为15～25mmol/L、乙二胺四乙酸的浓度为2～3mmol/L、盐酸的体积浓度为0.1％～0.2％、异丙醇的体积浓度为20％～30％。

在其中一些实施例中，所述第二洗涤液包括以下原料：乙酸钠、乙酸铵和冰乙酸。

在其中一些实施例中，所述第二洗涤液中乙酸钠浓度为150～200mmol/L，所述乙酸铵的浓度为200～300mmol/L、冰乙酸的体积浓度为1％～2％，所述乙醇的体积浓度为5-10％。

在其中一些实施例中，所述洗脱液包括三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸。

在其中一些实施例中，所述洗脱液中三羟甲基氨基甲烷的浓度5～15mmol/L、乙二胺四乙酸的浓度为1～2mmol/L。

另外，本申请还提供了一种所述的粪便基因组提取试剂盒的使用方法，包括下述步骤：

在粪便样本中加入所述裂解液、乙醇和蛋白酶K溶液，并置于离心管中混合均匀后得到第一混合液；

将所述第一混合液置于金属浴中孵育后进行离心处理，收集上清液；

在所述上清液中加入异丙醇混合均匀后静置，得到第二混合液；

将所述第二混合液转移至DNA制备管中离心，弃滤液；