[发明专利]一种骨髓间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：

S1：制备过表达Scleraxis蛋白的骨髓间充质干细胞，获得BMMSC^SCX细胞；

S2：刺激所述BMMSC^SCX细胞分泌外泌体。

2.根据权利要求1所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：在S1中，所述Scleraxis蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：在S1中，采用慢病毒感染的方法构建过表达Scleraxis蛋白的骨髓间充质干细胞。

4.根据权利要求3所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：慢病毒感染的方法的操作过程如下：使用SCX病毒悬液感染骨髓间充质干细胞；所述SCX病毒悬液的制备方法为：接种293T细胞，并使用DMEM培养基将293T细胞培养至细胞密度为70％-80％；在DMEM培养基中加入转染体系，转染过程持续10-12h；所述转染体系包括整合有SCX基因的质粒。

5.根据权利要求4所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：将SCX基因整合在PGMLV-CMV-MCS-ZsGreen1-T2A-Blasticidin上，获得整合有SCX基因的质粒。

6.根据权利要求5所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：在S2中，使用CORNING DMEM/F12培养基培养BMMSC^SCX细胞至细胞密度为80％；将CORNING DMEM/F12培养基更换为无外泌体血清培养基，继续培养至细胞密度达到90-100％，然后收取细胞上清液。

7.根据权利要求6所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：在S2中，通过梯度离心的方法从所述细胞上清液中提取外泌体。

8.一种骨髓间充质干细胞外泌体，其特征在于：其由过表达Scleraxis蛋白的骨髓间充质干细胞分泌获得。

9.根据权利要求8所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体，其特征在于：其含有序列如SEQ ID NO.2所示的microRNA。

10.根据权利要求8或9所述的一种骨髓间充质干细胞外泌体在制备促进腱骨愈合的药物中的应用。