[发明专利]一种与绵羊F17大肠杆菌相关的miRNA及其应用

说明书

本发明提出了一种与绵羊F17大肠杆菌相关的分子标志物miR‑299‑5p、所述miR‑299‑5p的靶向绵羊β防御素2基因（SBD2），以及miRNA在研究绵羊小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌感染中的应用，所述SBD2基因的NCBI序列号为NM_001198545.1，miR‑299‑5p能够提高小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌感染小肠上皮细胞的能力。本发明不仅可以通过对靶基因的负调控来调控小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌的感染，还可以更加深入的探究SBD2在湖羊小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌感染中的作用及其调控机制的研究，为防御素在生产上的应用提供一定的理论依据。本发明所公开的miR‑299‑5p还应用于为研发因F17大肠杆菌引起的疾病的抗细菌药物提供了一个新的药物靶点，可用于评价提高养羊业的经济效益。

技术领域

本发明涉及一种与绵羊F17大肠杆菌相关的miRNA及其应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

据了解，腹泻型大肠杆菌是一类能够广泛引起人类和动物腹泻的常见病原之一。F17大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，能够引起初生羔羊大规模的腹泻，致死率高。随着养羊产业的快速现代化和规模化发展，大肠杆菌病成为制约羊产业快速发展的重要因素之一。为了提高羔羊成活率，促使中国羊产业快速健康发展，从遗传角度攻克大肠杆菌病的发病机制，从而提高羔羊对大肠杆菌的抗性是目前急需解决的难题。

MicroRNA(miRNA)是一类约由19-22个核苷酸组成的内源性单链非编码小分子RNA，几乎参与细胞所有的生命活动过程。据研究表明miRNA通过调节大部分蛋白质编码基因来影响若干主要的生物学途径。然而，目前缺少调控绵羊F17大肠杆菌病的miRNA标志物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足而提供一种与绵羊F17大肠杆菌相关的miRNA及其应用，可以通过对靶基因的负调控来调控小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌的感染；可以更加深入地探究SBD2在绵羊小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌感染中的作用及其调控机制的研究，为防御素在生产上的应用提供一定的理论依据，提高羔羊抗F17大肠杆菌的能力，提高养羊业的经济效益。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明提供了一种与绵羊F17大肠杆菌相关的miRNA，所述miRNA的靶基因为SBD2，其NCBI登录号为NM_001198545.1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种与绵羊F17大肠杆菌相关的miRNA，所述miRNA为miR-299-5p，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明在湖羊羔羊小肠上皮细胞感染F17大肠杆菌，约6h后检测其基因表达情况，从中筛选出F17大肠杆菌关键基因SBD2，然后通过生物信息学预测与基因SBD2具有靶向关系的miRNA，即：miR-299-5p。

本发明还提供了上述与绵羊F17大肠杆菌相关的miRNA在绵羊抗F17大肠杆菌感染中的应用。

所述的绵羊为湖羊，优选3～5日龄湖羊羔羊的小肠上皮细胞。F17大肠杆菌感染羔羊小肠上皮细胞的时间为0h和6h。

上述与绵羊F17大肠杆菌相关的miR-299-5p，在研究湖羊小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌感染中的应用，所述miR-299-5p通过对靶基因SBD2的负调控来调控湖羊小肠上皮细胞抗F17大肠杆菌的感染。

本发明通过qRT-PCR验证发现，miR-299-5p在湖羊小肠上皮细胞感染F17大肠杆菌约6h后的相对表达量与基因SBD2的相对表达量呈强负相关，初步判断miR-299-5p与基因SBD2存在靶向关系。

上述应用包括miR-299-5p减少黏附至湖羊小肠上皮细胞上的F17大肠杆菌数量。