[发明专利]樱花SSR分子标记引物及在20个樱花品种鉴定中的应用

说明书

本发明公开了樱花SSR分子标记引物及在20个樱花品种鉴定中的应用，通过从尾叶樱基因组数据中独立开发了樱花品种SSR相关的分子标记引物，对开发的16对SSR引物进行扩增及多态性筛选，最终选择引物ZJF01和ZJF02进行24个品种的鉴定，结果验证通过2对引物组合就能将其中的20个樱花品种进行区分鉴定，可见，本发明能够采用很少的引物组合就能鉴别出20个樱花品种，丰富了樱花品种分子标记鉴定的类型，由于选用的引物对少，可以大大提高鉴定效率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及樱花SSR分子标记引物及在20个樱花品种鉴定中的应用。

背景技术

樱花为蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus sensu lato)樱亚属植物(subgenusCerasus)的统称。樱花是世界著名观花乔木，盛开时繁花满树，末花时落英缤纷；作为经济价值较高的果木和高雅的园林花木，具有广阔的开发利用前景。近百年来，通过自然变异筛选和人工杂交培育出600多个樱花园艺品种。但是，由于许多品种间形态相似性较高、品种来源记载不详、同物异名与异物同名现象频发；且多数樱花先花后叶，花叶不同期，易于杂交，形态变异丰富多样，生活史长、花期相对较短，缺乏快速准确的鉴定方法(王贤荣，2014，Shi et al.，2013)。

近百年来，人们通过自然变异筛选和杂交培育的方式获得了600多个樱花园艺品种(袁冬明等，2018)。针对这些园艺品种，分类学家先后根据树形、花、果、叶、冬芽等形态特性提出三级、五级分类标准及花期、花色分类标准(时玉娣，2007，藤木俊雄，2009，张琼等，2012)。由于不同学者对形态性状的判断标准不一样，品种间性状交叉、重叠及在不同环境中具有很强的可塑性，造成形态学鉴定的困难，从而造成品种名混淆，同物异名、异物同名等现象时常发生。

随着分子生物学的兴起，分类学家开始使用不同的DNA分子标记研究樱花种质资源的多样性及亲缘关系。研究人员利用RFLP、AFLP等分子标记区分欧洲甜樱桃(P.avium)与欧洲酸樱桃(P.cerasus)(Badenes and Parfitt，1995；Hisayo et al.，2003；Zamani andBouzari，2012)，利用SSR、ISSR和SCAR标记区分樱桃(P.pseudocerasus)、欧洲甜樱桃、草原樱桃(P.fruticosa)、山樱花(P.serrulata)等(Cantini，2001；Khadivi-Khub et al.，2014；Barac et al.，2014；Kato et al.，2014；Zhang and Gu，2016；赵庆杰等，2016；宗宇等，2016)。但是，由于樱花品种繁多，已有的分子标记分辨率低，不足以鉴定区分全部品种，因此，持续不断开发新的分子标记，对于樱花品种鉴定是非常必要的。SSR标记因其多态性高、稳定性好、多等位基因、共显性、数量丰富、基因组覆盖性好和操作简单等优点(Powellet al，1996)广泛用于遗传多样性、品种指纹图谱绘制、品种鉴定、遗传图谱、目的基因定位等领域。本研究从尾叶樱基因组数据中开发樱花品种SSR相关分子标记，并研究其在樱花品种鉴定中的应用，对樱花品种鉴定以及分子标记辅助育种具有重要意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种樱花SSR分子标记引物。

本发明的目的之二在于提供樱花SSR分子标记引物在樱花品种鉴定中的作用。

本发明目的之三在于提供一种鉴定樱花的试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

樱花SSR分子标记引物，所述分子标记引物包括如下两对，其正向引物和反向引物的核苷酸序列具体如下：

(1)ZJF01：正向引物序列为F：GATGTAGAGGGAGGTTCTGTATTTG(如SEQ ID NO.1所示)，反向引物序列为R：ACGGATCTAGTGAGGGATGGGTATG(如SEQ ID NO.2所示)；