[发明专利]厚壁菌门与拟杆菌门的核酸检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种厚壁菌门与拟杆菌门的检测引物组，其特征在于，包含检测厚壁菌门与拟杆菌门的多重qPCR引物和探针，检测厚壁菌门的上游引物、下游引物和探针分别为Fir-F1、Fir-R1和Fir-P1，其序列依次如SEQ ID NO.1～3所示；检测拟杆菌门的上游引物、下游引物和探针分别为Bac-F1、Bac-R1和Bac-P1，其序列依次如SEQ ID NO.16～18所示。

2.根据权利要求1所述检测引物组，其特征在于，所述厚壁菌门探针的5’端荧光发射基团为FAM，3’端淬灭基团为BHQ1；拟杆菌门探针的5’端荧光发射基团为TEXAS RED，3’端淬灭基团为BHQ2。

3.权利要求1或2所述检测引物组在制备同时检测肠道菌群中厚壁菌门与拟杆菌门试剂中的应用。

4.一种同时检测厚壁菌门和拟杆菌门的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1或2所述检测引物组。

5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，还含有荧光PCR反应所需试剂：5×DNA PCRBuffer，酶系，dd H₂O。

6.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包含以下步骤：

S1.提取待测粪便样本中的核酸作为模板；

S2.取S1步骤中的模板，利用权利要求1所述检测引物组进行荧光定量PCR反应；

S3.分析S2步骤的反应结果。

7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，步骤S2中的荧光定量PCR反应体系为：待检测核酸样本5μL，5×DNA PCR Buffer 5μL，上游引物0.1μL，下游引物0.1μL，探针0.1μL，酶系3μL，ddH₂O 6.4μL。

8.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，步骤S2中的荧光定量PCR反应体系中上游引物、下游引物和探针的终浓度为10pmol。

9.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，步骤S2中的荧光定量PCR反应条件为：50℃，2min，1个循环；95℃，5min，1个循环；95℃，5sec，60℃，20sec，45个循环。

10.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，步骤S3中的结果判断方法如下：

阳性检测结果的判断依据为：对应荧光通道内出现扩增曲线且Ct值≤38；

通过分别读取厚壁菌门Fir和拟杆菌门Bac菌的Ct值，计算所测样本中厚壁菌门与拟杆菌门的菌群比值，Fir/Bac菌群比值越大代表肥胖程度越高，Fir/Bac菌群比值越小代表存在2型糖尿病风险越高。