[发明专利]一种竹叶青PLA2蛋白特异性短肽、抗竹叶青PLA2蛋白抗体和蛇伤检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种竹叶青PLAsubgt;2/subgt;蛋白特异性短肽、抗竹叶青PLAsubgt;2/subgt;蛋白抗体和蛇伤检测试剂盒，属于抗体及免疫检测技术领域。一种竹叶青PLAsubgt;2/subgt;蛋白特异性短肽，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。采用所述短肽筛选得到的抗竹叶青PLAsubgt;2/subgt;蛋白单克隆抗体PLAsubgt;2/subgt;‑mc8与竹叶青天然PLAsubgt;2/subgt;蛋白具有较高的特异性亲和能力。由PLAsubgt;2/subgt;蛋白单克隆抗体制成的蛇伤诊断试剂盒，能够用于诊断蛇伤是否被竹叶青咬伤，并且以抗体抗原免疫反应为检测诊断基础，大大提高了蛇伤诊断效率和结果准确性。

技术领域

本发明属于抗体及免疫检测技术领域，具体涉及一种竹叶青PLA₂蛋白特异性短肽、抗竹叶青PLA₂蛋白抗体和蛇伤检测试剂盒。

背景技术

竹叶青蛇是世界10大最致命生物之一，产生的毒素是血循毒。血循毒的种类多，成份复杂，以心血管和血液系统为主，产生多方面的毒性作用。竹叶青咬人时的排毒量小，其毒性以出血性改变为主，一次可排干毒15毫克，但平均100毫克才会致死，所以很少至人死命，但如果不及时治疗，会留下伤残。

目前辨认毒蛇咬伤的方法在现有临床上主要依靠家属或病人对毒蛇图册的指认、临床表现和蛇牙痕等主要方法鉴别，该类方法诊断误差非常大。有大量病例因未能鉴别出咬伤蛇种，延误了宝贵的治疗窗口时间，而死亡。以抗体抗原免疫反应为检测诊断基础，能够大大提高蛇伤诊断效率。目前我国抗蛇毒血清种类较少，抗血清品种无法覆盖所有剧毒蛇种。而蛇毒所含毒性成分十分复杂，主要包括酶、神经毒性多肽、生物活性因子和膜活性多肽。蛇毒中至少含有10～15种酶，它们与蛇伤造成的出血、水肿、肌肉坏死和血凝失调有密切的关系。磷酸脂酶A₂(PLA₂)在蛇毒中含量丰富。研制出针对PLA₂的抗体对快速检测竹叶青蛇咬伤具有重要意义。目前缺乏有效特异性竹叶青PLA₂的单克隆抗体，以及用于筛选竹叶青PLA₂的单克隆抗体的PLA2蛋白特异性短肽。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种竹叶青PLA₂蛋白特异性短肽，能够用于特异性筛选PLA₂蛋白单克隆抗体。

本发明的目的还在于提供一种抗竹叶青PLA₂蛋白抗体和蛇伤检测试剂盒，实现竹叶青蛇伤快速诊断。

本发明提供了一种竹叶青PLA₂蛋白特异性短肽，所述短肽的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。

本发明提供了一种由所述短肽筛选得到的抗竹叶青PLA₂蛋白单克隆抗体PLA₂-mc8，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明提供了一种竹叶青蛇伤ELISA检测试剂盒，包括包被抗竹叶青PLA₂蛋白的多克隆抗体的固相载体、酶标记的所述抗竹叶青PLA₂蛋白单克隆抗体PLA₂-mc8。

优选的，所述抗竹叶青PLA₂蛋白多克隆抗体是用从竹叶青蛇毒中分离纯化的PLA₂蛋白免疫动物制备得到。

优选的，所述竹叶青PLA₂蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

优选的，所述固相载体中抗竹叶青PLA₂蛋白的多克隆抗体的包被浓度为1～100μg/ml。

优选的，所述检测试剂盒还包括洗涤液、样品稀释液、底物、显色液和阳性标准品。