[发明专利]一种大麦CBF4基因的Indel分子标记及其应用

权利要求书

1.一种大麦CBF4基因的Indel分子标记，其特征在于，所述Indel分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1-2所示。

2.根据权利要求1所述的大麦CBF4基因的Indel分子标记，其特征在于，所述Indel分子标记是根据CBF4基因启动子上游的一个插入缺失变异设计的。

3.根据权利要求2所述的大麦CBF4基因的Indel分子标记，其特征在于，所述插入缺失变异为CBF4基因启动子上游700-610bp处的一个73bp的插入缺失变异。

4.如权利要求1-3任一项所述的Indel分子标记在扩增、检测和/或鉴定大麦CBF4基因中的应用。

5.一种大麦CBF4基因的检测方法，其特征在于，所述方法包括：提取待测DNA，采用如权利要求1所述的Indel分子标记进行PCR扩增，检测扩增产物的条带大小，其中与参考品种Morex序列一致的CBF4基因型扩增出216bp条带，有缺失的等位基因类型扩增条带为143bp条带，杂合型的扩增条带为216bp和143bp条带。

6.如权利要求1中所述的CBF4基因或如权利要求1-3任一项所述的Indel分子标记在预测或鉴定大麦直立或匍匐性状中的应用。

7.一种大麦直立或匍匐性状的检测方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1、提取待测大麦材料的基因组DNA；

步骤2、以步骤1提取得到的基因组DNA为模板，采用如权利要求1所述的Indel分子标记进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

步骤3、观察电泳检测结果，其中当仅扩增出一条216bp的条带时，说明待测大麦材料为非匍匐性状；其中当仅扩增出一条143bp的条带或扩增出216bp和143bp两条条带时，说明待测大麦材料为匍匐性状。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，步骤2中所述PCR扩增的反应程序包括：

95℃变性5分钟；

循环1：包含94℃变性30秒；65℃-58℃退火15秒，其中每个循环降低0.5℃；72度延伸15秒；共14个循环；

循环2：包含94℃变性30秒；58℃退火15秒；72℃延伸15秒；共14个循环；

72℃延伸3分钟；

25度保存。

9.一种用于检测大麦直立或匍匐性状的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括如权利要求1-3任一项所述的Indel分子标记。

10.如权利要求1-3任一项所述的Indel分子标记在大麦直立或匍匐性状的分子标记辅助育种或大麦种质资源鉴定中的应用。