[发明专利]一种纳豆芽胞杆菌高密度发酵培养基及其高密度发酵方法

权利要求书

1.一种纳豆芽胞杆菌高密度发酵培养基，其特征在于，包括大豆蛋白胨8-15g/L，酵母提取物5-8g/L，氯化钠2-5g/L，海藻糖5-10g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，pH7.2-7.4。

2.根据权利要求1所述的纳豆芽胞杆菌高密度发酵培养基，其特征在于，所述培养基中优选还包括植物油，其添加量为培养基总质量的0.01％-0.03％。

3.一种利用权利要求1所述的发酵培养基进行纳豆芽胞杆菌高密度液体发酵的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将纳豆芽胞杆菌从菌种管进行复苏；

(2)将复苏的菌株进行培养用于摇瓶发酵；

(3)斜面种子加入生理盐水后全部刮下后接种摇瓶；

(4)摇瓶种子液接入种子罐进行一级发酵；

(5)将一级发酵液加压转接二级发酵罐，进行二级发酵；

(6)将二级发酵液加压转接三级发酵罐，进行三级级发酵；

(7)放罐离心，收集菌泥；

(8)烘箱烘干，粉碎机粉碎制备纳豆芽胞杆菌微生态制剂；

(9)活菌计数，计算产量。

4.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(2)中将复苏的菌株34-36℃培养箱培养8-12h得到斜面种子，用于摇瓶发酵。

5.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(3)中摇瓶培养参数：培养基初始pH7.2-7.4、接种量为5-10％、摇床转速200-220rpm、培养温度34-36℃、培养8-10h后，转接一级发酵罐。

6.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(4)中一级发酵罐中一级发酵参数为：培养基初始pH为7.2-7.4，接种量为5-10％、通气量0.6-1.2L/min、罐内压力为0.1-0.2MPa、转速设置800-900rpm、发酵温度34℃-36℃、培养时间为5-6h，转接二级发酵罐。

7.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(5)中二级发酵罐中二级发酵参数为：为培养基初始pH7.2-7.4，接种量5-10％、通气量0.48-0.72m³/h、压力为0.1-0.2MPa转速设置350-400rpm、发酵温度34℃-36℃、发酵3.5-4.5h，转接三级发酵罐。

8.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(5)中三级发酵罐中三级发酵参数为：培养基初始pH为7.2-7.4，通气量4-5m³/h、接种量5-10％、罐内压力为0.1-0.2MPa、转速设置140-150rpm、发酵温度34-36℃、发酵1-2h后开始分段调控发酵参数。

9.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(5)中在罐转接种后，菌体繁殖速度快，大罐内耗氧量不断快速降低，在接种1-2h之后频繁调整通气量，使得溶氧电极显示溶氧维持70-90％，5-6h后溶氧逐步开始回升，此时发酵泡沫过多，降低转速，10h后逐渐开始形成芽胞，可以逐步降低通气和搅拌促进产芽胞，使得溶氧维持40-60％，为进一步促进芽胞产生，继续降低溶氧，最终使得溶氧维持30-40％。

10.根据权利要求3所述的发酵的方法，其特征在于，步骤(7)中放罐离心，收集菌泥为离心后的菌泥加入等量淀粉，混合均匀之后45-55℃烘干，粉碎制得纳豆芽胞杆菌菌粉。