[发明专利]一种马的细管冻精制作方法

权利要求书

1.一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、配制稀释液和冷冻液；

S2、采精人员从公马上采集采精；

S3、对采集的精液检查与处理；

S4、将精液离心、再稀释、灌装和平衡；

S5、将S4中的冻精细管冷冻。

2.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述稀释液包括如下重量份的原料：2-吗啉乙磺酸6-8份、无水葡萄糖40-60份、一水乳糖2-4份、五水棉籽糖2-4份、五水柠檬酸钠1-3份、一水柠檬酸钾1-3份、羟乙基哌嗪乙硫磺酸8-10份、无菌蒸馏水100-200份、脱脂奶100-200份、卵黄1-3份；

所述稀释液的配置方法为：称取2-吗啉乙磺酸、无水葡萄糖、一水乳糖、五水棉籽糖、五水柠檬酸钠、一水柠檬酸钾和羟乙基哌嗪乙硫磺，并使用无菌蒸馏水配制成溶液；用1mol/L氢氧化钠溶液与PH计，将所得溶液PH值调至6.7；按1：1的配比在所配制的溶液中加入脱脂奶，放入合适容器中封口待用；在使用当天，在配制好的溶液中加入5％卵黄，即可制得稀释液。

3.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述冷冻液包括如下重量份的原料：2-吗啉乙磺酸6-8份、无水葡萄糖40-60份、一水乳糖2-4份、五水棉籽糖2-4份、五水柠檬酸钠1-3份、一水柠檬酸钾1-3份、羟乙基哌嗪乙硫磺酸8-10份、无菌蒸馏水100-200份、脱脂奶100-200份、甘油1-3份、卵黄1-3份；

所述冷冻液的配置方法为：称取2-吗啉乙磺酸、无水葡萄糖、一水乳糖、五水棉籽糖、五水柠檬酸钠、一水柠檬酸钾和羟乙基哌嗪乙硫磺，并使用无菌蒸馏水配制成溶液；用1mol/L氢氧化钠溶液与PH计，将所得溶液PH值调至6.7；按1：1的配比在所配制的溶液中加入脱脂奶，放入合适容器中封口待用；在使用当天，在配制好的溶液中加入2％卵黄和2.5％甘油，即可制得冷冻液。

4.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S2中，采精人员从公马上采集采精的方法为：

在公马充分勃起并爬跨假台马后，采精员站立于公马左侧，左手持假阴道，右手握成半月状揽住公马阴茎的中后部，将阴茎顺势引导入假阴道；阴茎在假阴道内来回抽动数次完成射精；采精人员将假阴道及时竖起并跟随公马后退，待龟头、阴茎从假阴道内出来之后，移开假阴道，完成公马采精。

5.根据权利要求1所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S3中，对采集的精液检查与处理，包括以下步骤：

S301、准备：将室温维持在26-28℃；接触精液的物品提前4h放在37℃恒温箱中；稀释液提前1h放在37℃恒温水浴锅中备用；离心液和冷冻液置于37℃水浴中半小时后取出、擦干并置于室温备用；

S302、预处理：采集的原精传递入精液处理室后，把集精瓶放入37℃的恒温水浴锅中，精液用四层消毒纱布过滤，然后用肉眼观察原精液的颜色，记录原精液量；

S303、精液检查、精液量及密度测定：根据气味和色泽，确认精液是否正常；从37℃无菌恒温干燥箱中取出纱布、刻度瓶，将精液迅速用灭菌纱布过滤至刻度瓶中，除去精液内的胶状物后再读取精液量；采用精子密度测定仪准确测定精子密度；

S304、精子活率检测：用干净的玻璃棒蘸取一滴稀释后的精液滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片，其间充满精液，不存留气泡；在200-400倍显微镜下观察精子活率。根据前进运动精子数的多少评定精子活率，计算公式为：

S305、精液稀释：采用稀释液对采集的精液进行稀释。

6.根据权利要求5所述的一种马的细管冻精制作方法，其特征在于，在所述步骤S305中，采用稀释液对采集的精液进行稀释，包括以下步骤：

S3050、将稀释精液所用的器具置于37℃恒温环境中，用等温稀释液冲洗2-3次；

S3051、将新采集的精液及时稀释，并置于35℃恒温水浴锅中；

S3052、将稀释液沿杯壁缓缓加入精液中，然后轻轻转动精液瓶或用灭菌玻璃棒搅动，混合均匀。