[发明专利]表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途

权利要求书

1.包含以下的表达载体用于在哺乳动物细胞中瞬时重组产生抗体的用途：

-按5’至3’方向包含第一启动子、编码抗体轻链的核酸、第一polyA信号序列和可选的第一转录终止子序列的第一表达盒；

-按5’至3’方向包含第二启动子、编码抗体重链的核酸、第二polyA信号序列和可选的第二转录终止子序列的第二表达盒；和

-按5’至3’方向包含第三启动子、赋予对选择剂的抗性的核酸、第三polyA信号序列和可选的第三转录终止子序列的第三表达盒；

其中所述表达盒双向组织，且其中所述第一表达盒和所述第二表达盒按相反方向排列。

2.权利要求1的用途，其特征在于所述编码抗体轻链的核酸和/或所述编码抗体重链的核酸包含至少一个内含子。

3.权利要求1至2中任一项的用途，其特征在于所述编码抗体轻链的核酸和/或所述编码抗体重链的核酸是cDNA。

4.权利要求1至3中任一项的用途，其特征在于所述第一和第二启动子是hCMV启动子，所述第一和第二polyA信号序列是bGH polyA信号序列，所述转录终止子序列存在且是hGT终止子序列。

5.权利要求1至4中任一项的用途，其特征在于所述第一和第二启动子是hEF1α启动子，所述第一和第二polyA信号序列是bGH polyA信号序列，所述表达盒不含转录终止子序列。

6.权利要求1至4中任一项的用途，其特征在于所述哺乳动物细胞选自CHO细胞、HEK细胞、BHK细胞、NS0细胞和SP2/0细胞。

7.权利要求1至6中任一项的用途，其特征在于所述哺乳动物细胞是HEK细胞。

8.权利要求1至7中任一项的用途，其特征在于所述表达载体包含：

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码第一抗体轻链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第一表达盒；

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码第二抗体轻链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第二表达盒；

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码第一抗体重链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第三表达盒；

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码第二抗体重链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第四表达盒；

或

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码抗体轻链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第一表达盒；

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码第一抗体重链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第二表达盒；和

-按5’至3’方向包含hCMV启动子、编码第二抗体重链的核酸、bGH polyA信号序列和hGT终止子序列的第三表达盒；

由此所述抗体轻链是两条抗体重链的共同轻链。

9.权利要求1至8中任一项的用途，其特征在于所述表达载体编码双特异性抗体。

10.权利要求1至9中任一项的用途，其特征在于所述双特异性抗体具有特异性结合第一抗原或抗原上的第一表位的第一结合特异性或结合部位，且所述双特异性抗体具有特异性结合第二抗原或抗原上的第二表位的第二结合特异性或结合部位。

11.权利要求1至10中任一项的用途，其特征在于所述表达载体包含：

-抗体轻链表达盒；

-第一抗体重链表达盒；

-第二抗体重链表达盒；和

-选择标记表达盒。