[发明专利]增强NK细胞杀伤力的基因靶标及应用

说明书

本发明公开了增强NK细胞杀伤力的基因靶标及应用。NK细胞发挥杀伤靶细胞的过程中，NK细胞受到信号触发，先通过脱颗粒过程释放Perforin、Granzyme B到达靶细胞，Perforin作用是在靶细胞膜上穿孔通道进而介导Granzyme B进入靶细胞，Granzyme B进入靶细胞后引发靶细胞的DNA断裂使靶细胞凋亡。CD107a也是NK细胞脱颗粒过程中的重要参与因子。因此，本领域技术人员通常通过检测Perforin、Granzyme B、CD107a的表达水平评价NK细胞的杀伤力强弱。本发明发现，高表达lncRNA‑AF289591可以有效提高NK细胞的杀伤力。

技术领域

本发明属于细胞免疫治疗领域，具体涉及增强NK细胞杀伤力的基因靶标及应用。

背景技术

NK细胞又称自然杀伤细胞，是机体固有免疫的组成细胞之一，主要分布于外周血和脾脏。在正常情况下，NK细胞通过识别细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子区分“自我”与“非我”以杀伤或诱导凋亡来清除肿瘤细胞或病毒感染细胞。目前，NK细胞已被广泛用于肿瘤的过继免疫治疗中。由于NK细胞仅占外周血淋巴细胞的5％～15％，因而可以通过体外扩增以满足临床治疗的需求。实验研究已表明，体外扩增的NK细胞在肝癌、胶质母细胞瘤、白血病等多种肿瘤中均表现出良好的抗肿瘤效应。

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度＞200nt但不具备编码蛋白质功能的RNA，占到非编码RNA的80％。lncRNA在细胞生命中发挥重要作用，对细胞各种功能至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供增强NK细胞杀伤力的基因靶标及应用。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种体外增强NK细胞杀伤力的方法，提高NK细胞中靶标基因的表达水平，靶标基因为长链非编码RNA。

优选地，所述长链非编码RNA为lncRNA-AF289591。

NK细胞发挥杀伤靶细胞的过程中，NK细胞受到信号触发，先通过脱颗粒过程释放Perforin、Granzyme B到达靶细胞，Perforin作用是在靶细胞膜上穿孔通道进而介导Granzyme B进入靶细胞，Granzyme B进入靶细胞后引发靶细胞的DNA断裂使靶细胞凋亡。CD107a也是NK细胞脱颗粒过程中的重要参与因子。因此，本领域技术人员通常通过检测Perforin、Granzyme B、CD107a的表达水平评价NK细胞的杀伤力强弱。本发明具体实施例说明，高表达lncRNA-AF289591可以有效提高NK细胞的杀伤力。

有益效果：

本发明发现，高表达lncRNA-AF289591可以有效提高NK细胞的杀伤力。

附图说明

图1是琼脂糖凝胶电泳测定lncRNA-AF289591表达水平。

图2是流式法检测Perforin、Granzyme B、CD107a表达水平。

具体实施方式

一、实验材料

淋巴细胞分离液购自杭州联科生物技术股份有限公司，品牌为MultiSciences。IL-2购自索莱宝，人AB血清购自上海联硕生物科技有限公司，NK细胞培养基品牌为CellGro。逆转录试剂盒购自TaKaRa，lncRNA-AF289591mimic、NC-mimic及PCR扩增引物购自上海生工。

二、实验方法

1、NK细胞培养和鉴定