[发明专利]PD-1阻断剂增强NK细胞杀伤力的用途

说明书

本发明公开了PD‑1阻断剂增强NK细胞杀伤力的用途。NK细胞发挥杀伤靶细胞的过程中，NK细胞受到信号触发，先通过脱颗粒过程释放Perforin、GranzymeB到达靶细胞，Perforin作用是在靶细胞膜上穿孔通道进而介导GranzymeB进入靶细胞，GranzymeB进入靶细胞后引发靶细胞的DNA断裂使靶细胞凋亡。CD107a也是NK细胞脱颗粒过程中的重要参与因子。因此，本领域技术人员通常通过检测Perforin、GranzymeB、CD107a的表达水平评价NK细胞的杀伤力强弱。据此可以说明，本发明通过阻断NK细胞中PD‑1表达后有效提高了NK细胞的杀伤力。

技术领域

本发明属于细胞免疫治疗领域，具体涉及PD-1阻断剂增强NK细胞杀伤力的用途。

背景技术

NK细胞又称自然杀伤细胞，是机体固有免疫的组成细胞之一，主要分布于外周血和脾脏。在正常情况下，NK细胞通过识别细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子区分“自我”与“非我”以杀伤或诱导凋亡来清除肿瘤细胞或病毒感染细胞。目前，NK细胞已被广泛用于肿瘤的过继免疫治疗中。由于NK细胞仅占外周血淋巴细胞的5％～15％，因而可以通过体外扩增以满足临床治疗的需求。实验研究已表明，体外扩增的NK细胞在肝癌、胶质母细胞瘤、白血病等多种肿瘤中均表现出良好的抗肿瘤效应。

PD-1是一种在激活的淋巴细胞上表达的抑制性受体，通过与肿瘤细胞表面表达的程序性细胞死亡配体1(PD-L1)结合，调节T细胞激活，介导肿瘤细胞的免疫逃逸。在对NK细胞的扩增过程中，PD-1阻断增强作用，对于患者的治疗具有积极的意义。

1,3-O-二咖啡酰奎宁酸在免疫细胞调节方面有一些研究报道，但是对NK细胞体外培养的影响以及作用机制未见研究和报道。

发明内容

本发明的目的在于提供PD-1阻断剂增强NK细胞杀伤力的用途。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

PD-1阻断剂用于NK细胞体外培养增强其杀伤力的用途。NK细胞发挥杀伤靶细胞的过程中，NK细胞受到信号触发，先通过脱颗粒过程释放Perforin、Granzyme B到达靶细胞，Perforin作用是在靶细胞膜上穿孔通道进而介导Granzyme B进入靶细胞，Granzyme B进入靶细胞后引发靶细胞的DNA断裂使靶细胞凋亡。CD107a也是NK细胞脱颗粒过程中的重要参与因子。因此，本领域技术人员通常通过检测Perforin、Granzyme B、CD107a的表达水平评价NK细胞的杀伤力强弱。据此可以说明，具体实施例通过阻断NK细胞中PD-1表达后有效提高了NK细胞的杀伤力。

优选地，所述PD-1阻断剂为1,3-O-二咖啡酰奎宁酸。具体实施例中，1,3-O-二咖啡酰奎宁酸有效阻断NK细胞中PD-1表达水平。

有益效果：

本发明发现，1,3-O-二咖啡酰奎宁酸用于NK细胞体外培养时可以有效增强其杀伤力，1,3-O-二咖啡酰奎宁酸发挥该作用的机制可能与阻断PD-1有关。

附图说明

图1是Westernblot检测PD-1含量水平。

图2是流式法检测Perforin、Granzyme B、CD107a表达水平。

具体实施方式

一、实验材料

淋巴细胞分离液购自杭州联科生物技术股份有限公司，品牌为MultiSciences。IL-2购自索莱宝，人AB血清购自上海联硕生物科技有限公司，NK细胞培养基品牌为CellGro。

1,3-O-二咖啡酰奎宁酸购自成都瑞芬思生物科技有限公司，HPLC≥98％。

二、实验方法

1、NK细胞培养和鉴定