[发明专利]一种重组工程菌及其在制备D-泛酸中的应用

说明书

本发明涉及一种重组工程菌及其在制备D‑泛酸中的应用，将重组工程菌经过诱导表达后与缬氨酸、甲醛、甲酸铵、β‑丙氨酸，在30‑40℃、pH为4‑7条件下，反应10‑60h，制得D‑泛酸。本发明以缬氨酸甲醛和β‑丙氨酸为底物发酵转化生成D‑泛酸，原料价廉易得，反应成本低。

技术领域

本发明涉及生物合成领域，具体涉及一种重组工程菌及其在制备D-泛酸中的应用。

背景技术

泛酸又称维生素B₅，为包括人和家畜在内的哺乳动物的必须营养元素，并在机体细胞中用于生物合成辅酶A(CoA)和酰基载体蛋白(ACP)，进而参与一百多种细胞代谢反应。现有技术一般用缬氨酸作为底物生产D-泛酸，但存在反应步骤繁琐、反应时间长、转化过程中的辅酶NADPH消耗带来的成本高等缺陷，限制了其产业化应用前景。需要研究更为高效的D-泛酸制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组质粒，包括：

含有L-氨基酸脱氨酶编码基因的第一重组质粒；

和/或，含有醛缩酶编码基因的第二重组质粒；

和/或，含有甲酸脱氢酶编码基因和酮泛解酸还原酶编码基因的第三重组质粒；

和/或，含有泛酸合成酶编码基因的第四重组质粒。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶编码基因来源于奇异变形杆菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶编码基因经过密码子优化得到L-氨基酸脱氨酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQID NO:1所示。

本发明优选的技术方案，所述L-氨基酸脱氨酶优化基因序列进行人工合成并加上酶切位点得到目的基因1。

本发明优选的技术方案，所述第一重组质粒所采用质粒为pET-28a质粒。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶编码基因来源于大肠杆菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶编码基因经过密码子优化得到醛缩酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明优选的技术方案，所述醛缩酶优化基因序列进行人工合成并加上酶切位点得到目的基因2。

本发明优选的技术方案，所述第二重组质粒所采用质粒为pET-28a质粒。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶编码基因来源于伯克霍尔德氏菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶编码基因经过密码子优化得到甲酸脱氢酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示。

本发明优选的技术方案，所述甲酸脱氢酶优化基因序列进行人工合成并加上酶切位点得到目的基因3。

本发明优选的技术方案，所述酮泛解酸还原酶编码基因来源于嗜麦芽窄食单胞菌，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。

本发明优选的技术方案，所述酮泛解酸还原酶编码基因经过密码子优化得到酮泛解酸还原酶优化基因序列。

本发明优选的技术方案，所述酮泛解酸还原酶优化基因序列的核苷酸序列如SEQID NO:4所示。